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本论文的研究内容主要分为两个部分:(1)设计了基于适配体(aptamer)-羧基化氧化石墨烯(CFGO)/单壁碳纳米管(SWCNTs)修饰电极为基础的传感平台,并应用于湖水中的大肠杆菌检测;(2)设计了基于aptamer-羧基化石墨烯(CFrGO)修饰电极为基础的传感平台,并应用于肉类和奶制品中的大肠杆菌检测。具体研究内容如下: 在第二章中,首先对氧化石墨烯进行了羧基化,得到水溶性好、羧基含量为18.3%的羧基化氧化石墨烯,用扫描电镜(SEM)、透射电镜(TEM)、光电子能谱(XPS)等方法对其进行了表征。采用滴涂法将SWCNTs滴加到玻碳电极表面,用于增强电化学信号,再滴加CFGO于SWCNTs修饰电极表面,通过缩合试剂法将末端带胺基的适配体固定到CFGO/SWCNTs修饰电极的羧基上,获得了aptamer-CFGO/SWCNTs/GCE。探讨了电极性能的影响因素,如SWCNTs的滴加次数、羧基的活化时间、适配体固定时间等,还讨论了大肠杆菌的孵育时间对检测的影响。同时采用交流阻抗法对修饰电极组建过程和细菌检测进行了研究。结果表明,CFGO表面含有羧基,能有效固定适配体,SWCNTs的引入提高了电极的电子传导能力,而且aptamer-CFGO/SWCNTs/GCE对于目标细菌大肠杆菌KCTC2571具有很好的特异性识别能力,有较宽的检测范围(102-107CFU/mL)和较低的检测限(LOD=2.7CFU/mL,S/N=3).,能实际用于湖水中大肠杆菌的检测。 在第三章,首先用二氧化硫脲(TUD)还原了羧基化氧化石墨烯上除羧基之外的含氧基团,再通过2,2-偶氮二异丁腈(AIBN)在石墨烯上引入-CN,通过水解反应使石墨烯上带有更多的羧基,获得羧基含量达到20%的羧基化石墨烯(CFrGO)。同样制备了CFrGO修饰电极,并通过酰胺化反应完成了适配体的固定,获得了以aptamer-CFrGO/GCE为基础的传感器;探索了羧基活化时间、酰胺化反应时间对适配体传感器电化学性能的影响,并通过研究适配体传感器与大肠杆菌孵育时间的影响,得到了最佳的检测条件。在最优条件下,对不同浓度的目标细菌进行了检测。实验结果表明CFrGO不但能固定适配体,而且具有良好的电子传导能力。CFrGO/GCE在大肠杆菌浓度为101-107CFU/mL的范围内,具有良好的线性关系,R2=0.9977.线性关系为ΔRct=437.32+306.39×log(C(E.coli)),检测限为1.97CFU/mL。在肉类和奶制品中进行了实样检测,检测结果与平板计数法接近。 因此,基于两种不同功能化石墨烯构建的适配体传感器,为实际监测细菌提供了可能性,而且有望通过更换识别元件-适配体,形成其他微生物检测平台。