研究目的:　　肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)是肿瘤坏死因子超家族的新成员,通过与其受体成纤维细胞因子诱导14(Fn14)结合后发挥作用。TWEAK及其受体Fn14在多种肿瘤细胞与组织中表达,具有广泛的生物学活性,在诱导细胞凋亡,促进细胞增殖和血管形成,提高细胞侵袭力,诱导炎症因子表达等方面发挥作用。研究表明TWEAK、Fn14在人卵巢癌组织中表达,但TWEAK、Fn14在卵巢癌发生发展,侵袭和转移以及对免疫细胞的作用及作用机制尚未见报道。本研究目的在于通过对TWEAK在卵巢癌转移中起到的作用进行初步探讨,对今后发展新的治疗方法提供有价值的实验参考数据。　　研究方法:　　1.采用体外实验的方法观察TWEAK对HO-8910PM细胞侵袭、移动和粘附能力的影响,观察TWEAK对细胞IkB-α、NF-kB(P65)和VEGF蛋白表达的影响,以及应用NF-kB拮抗剂吡咯醛二硫氨基甲酸(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)处理后VEGF的变化趋势,探讨TWEAK在卵巢癌细胞侵袭转移中的作用、可能机制及其信号传导途径。　　2.使用免疫组化方法检测不同卵巢肿瘤组织中TWEAK,Fn14,VEGF,微血管(CD34)的表达情况。对表达情况进行分析,并与样本的临床信息进行相关统计,寻找TWEAK,Fn14;VEGF,微血管(CD34)在卵巢癌发生发展过程中的表达特点及其相互之间的关系。　　3.采用体外细胞共培养的实验方法,观察TWEAK刺激后的THP-1细胞上清对卵巢癌细胞HO-8910PM在细胞增殖、侵袭能力上的影响。使用realtime PCR及ELISA方法检测TWEAK刺激后HO-8910PM中MCP-1 mRNA以及蛋白的表达变化,采用ELISA方法检测TWEAK刺激后THP-1细胞表达TNF-α的变化。采用TWEAK与TNF-α共刺激的方法观察卵巢癌细胞的增殖能力。阐述TWEAK刺激后的巨噬细胞在卵巢癌转移中可能起到作用的途径。　　4.采用体外实验的方法探讨NF-kB微小RNA199a在细胞侵袭、转移能力的影响,采用western blot的方法观察微小RNA199a转染细胞后,对细胞内NF-kB通路的影响,寻找微小RNA199a与TWEAK在细胞侵袭转移中的共通点及相互关系,为今后的研究打下基础。　　研究结果:　　1.TWEAK对人卵巢癌细胞HO-8910PM增殖、侵袭、转移的影响及其机制研究。　　(1)TWEAK对人卵巢癌细胞HO-8910PM的增殖没有影响。　　(2)TWEAK能够增强HO-8910PM细胞对Matrigel的粘附能力。　　(3)TWEAK能促进HO-8910PM细胞的迁移和侵袭能力。　　(4)TWEAK能在HO-8910PM细胞中促进NF-kB的激活以及IkB的磷酸化。　　(5)TWEAK通过NF-kB通路的激活能够促进VEGF的表达。　　(6)NF-kB抑制剂能够抑制TWEAK诱导的细胞粘附迁移和侵袭。　　2.TWEAK,Fn14,VEGF以及新生微血管(CD34)在卵巢癌组织中的表达及其相关病理资料分析　　(1)TWEAK和Fn14的表达水平在恶性肿瘤中要远远高于良性肿瘤(P＜0.0001)。　　(2)在具有不同临床特征的恶性卵巢癌病例之间的TWEAK/Fn14的表达是没有差异的。　　(3)卵巢癌不同病理类型中TWEAK和Fn14的表达,结果各组也均无统计学差异,只要是卵巢癌,其表达均在80％以上。　　(4)不同卵巢组织中VEGF的表达有统计学差异;各组间微血管(CD34)计数有统计学差异,均以恶性肿瘤组为最高。　　(5)TWEAK与VEGF的表达呈一个正相关的形式(CorrelationCoefjficient=0.704)。　　3.TWEAK对巨噬细胞的影响在卵巢癌转移中的作用研究。　　(1)TWEAK能够通过刺激巨噬细胞影响HO-8910PM细胞的增殖力。　　(2)TWEAK能够通过巨噬细胞来抑制HO-8910PM细胞的侵袭能力。　　(3)TWEAK能够诱导HO-8910PM细胞MCP-1(单核细胞趋化蛋白-1)mRNA以及蛋白的表达。　　(4)TWEAK能够上调THP-1细胞TNF-α的表达。　　(5)TWEAK和TNF-α共同作用能够抑制HO-8910PM的增殖。　　4.有关NF-kB通路与miR-199a在细胞侵袭转移中的扩展研究　　(1)MiR-199a在内异症患者中的在位内膜和卵巢异位内膜中的表达是降低的。　　(2)异位表达的miR-199a能够降低ESC细胞的侵袭性。　　(3)MiR-199a能够抑制NF-kB通路的激活。　　(4)MiR-199a能够抑制ESC细胞IL-8的表达。　　结论:　　1.TWEAK能够通过激活NF-kB和上调VEGF的表达来促进人卵巢癌细胞HO-8910PM细胞的转移。抑制TWEAK激活的NF-kB通路能够抑制细胞的粘附,迁移和侵袭。TWEAK-Fn14/NF-kB通路可能是调节卵巢癌细胞转移的一个潜在的通路。　　2.TWEAK,Fn14,VEGF,微血管(CD34)在卵巢恶性肿瘤中是高表达的,TWEAK与卵巢癌的发生有关,与卵巢癌的进展没有明显的相关性。TWEAK的表达与VEGF在卵巢恶性肿瘤中的表达有着正相关性。但是在肿瘤的分级以及转移中没有统计学意义。　　3.TWEAK刺激巨噬细胞后能对卵巢癌细胞HO-8910PM的增殖以及侵袭能力产生抑制作用。TWEAK能刺激THP-1细胞表达TNF-α,TWEAK与TNF-α联合应用有着明显的抑制卵巢癌细胞增殖的作用。TWEAK能够诱导卵巢癌细胞表达MCP-1。TWEAK可能能够通过调节巨噬细胞来抑制卵巢癌的增殖和转移。　　4.NF-kB通路介导的细胞侵袭和转移能力能够通过miR-199a来抑制,其可能的机制是通过下调IL-8来实现的,miR-199a是否能够下调TWEAK诱导细胞侵袭转移能力还有待进一步研究,在未来的研究中将对TWEAK与miR-199a在细胞侵袭转移中的相互关系进行深入探讨。