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口腔癌是发生在人体组织中的一种较常见的恶性肿瘤。据统计,全球每年新增口腔癌患者约30万人,死亡人数约15万人,中国每年新增患者约48万人,死亡人数约22万人。世界卫生组织统计结果显示:口腔癌的发病率在人类可知的恶性肿瘤中排名第六位,而口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)作为口腔颌面部恶性肿瘤最为常见的恶性肿瘤之一,约占所有口腔颌面部恶性肿瘤的80%,且近年来的发生率呈逐年上升的趋势。口腔鳞状细胞癌具有很强的侵袭性,很容易向周围组织侵袭,故患者5年生存率仅为50%左右,因此早期发现并诊断口腔鳞状细胞癌对患者的治疗及预后有重要意义。在致瘤因素的作用下,口腔鳞状上皮可以发生从鳞状上皮不典型增生到鳞状细胞癌的变化,这是肿瘤发展的一个重要过程。根据细胞的异型程度、异型细胞所累及上皮层的层次及有无浸润,分为正常口腔鳞状上皮(normal oral epithelial,NOE)、口腔鳞状上皮不典型增生(oral epithelial dysplasia,OED)、口腔鳞状上皮原位癌(squamous carcinoma in situ,SCIS)及OSCC。而OED与早期OSCC在临床症状上并无明显区别,但其治疗方法却有很大差异,因此在活检标本中确定组织是否为OSCC显得尤其重要。但是在临床病理诊断工作中,常常因为组织切面等原因,对OED和OSCC的诊断出现鉴别困难的情况,这就要求人们通过不懈的探索,寻求适宜的方法来对疾病的诊断进行协助判断。近期的研究表明,肿瘤的发生、发展、侵袭和转移与上皮-间质转化(epithelial-to-mesenchymal transitions,EMT)有很大的联系。E-cadherin是EMT过程中的重要指标。大量的研究资料证明,E-cadherin蛋白能够抑制肿瘤细胞的侵袭行为,E-cadherin蛋白表达的减少是一种恶性标志,它在鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma,SCC)中或SCC的侵袭性周边表达降低,对OSCC的诊断有重要意义。Podoplanin可以通过改变肿瘤细胞的肌动蛋白细胞骨架,或促进肿瘤细胞形成伪足,参与肿瘤的侵袭和转移。目前已在多个系统多种恶性肿瘤中发现了podoplanin表达的现象,包括OSCC。E-cadherin表达的缺失被认为是肿瘤演进过程中的一个重要步骤,而podoplanin却可以在缺乏钙黏蛋白转变的情况下诱导肿瘤的发生。两者的协同作用是肿瘤发生、发展的重要途径。为给临床病理医师提供更加精准的方法,本课题采用免疫酶组织化学双重染色(免疫组化双染)的方法,检测口腔不同病变鳞状上皮组织中E-cadherin和podoplanin的表达情况,探索二者的免疫组化双染法在口腔鳞状上皮不同类型病变的诊断及鉴别诊断中的价值,判断其是否有助于早期浸润癌的判断。目的检测E-cadherin和podoplanin在口腔鳞状上皮不同类型病变中的表达情况,探讨二者的免疫组化双染方法在口腔鳞状细胞早期浸润癌病理诊断中的应用价值。材料和方法1.筛选2011年1月—2014年12月郑州大学第一附属医院口腔黏膜组织214例。经病理诊断,包含正常鳞状上皮组织(NOE)30例,不典型增生组织(OED)66例,原位癌(SCIS)组织45例,鳞状细胞癌(OSCC)组织73例。2.运用免疫组织化学双染法检测所有组织中E-cadherin和podoplanin的表达。3.筛选出17例在原病理诊断中对有无早期浸润现象诊断困难的口腔鳞状上皮病变的病例,运用上述检测方法检测可疑浸润区的两种指标的共同表达情况,并对这些病例进行随访,追踪病变进展情况。4.统计学处理:使用统计学软件SPSS 21.0进行数据分析和χ~2检验,以α=0.05为检验水准,当P<0.05时认为差异有统计学意义。当进行多组(n≥3组)率的两两比较时,用Bonferroni方法校正检验水准α,即P<2α/n(n-1)时认为差异有统计学意义。结果1.在免疫组化双染切片中,93.3%的NOE和65.2%的OED组织中E-cadherin正常表达的同时podoplanin表达阴性;在35.6%的SICS组织中E-cadherin正常表达的同时podoplanin表达阳性;在54.8%的OSCC组织中出现E-cadherin表达降低的同时podoplanin表达阳性。从上述实验结果可以看出,随着病变的加重,E-cadherin表达减弱而podoplanin阳性表达的概率逐步增加。4组间进行比较,差异具有统计学意义(χ~2=106.976,P<0.05)。2.用此免疫组化双染实验方法对以上17例鳞状上皮原位癌伴可疑浸润的样本进行检测,其中有5例(29.4%)出现了与OSCC一致的表现,对这17例进行随访或再次活检发现以上5例均确诊为OSCC。而可疑浸润区的着色与其它组织的明显不同,可能有助于对早期OSCC的快速识别。3.在不典型增生伴局灶癌变的样本中,癌变处组织的免疫组化双染结果出现E-cadherin正常表达的同时podoplanin表达阳性或E-cadherin表达降低的同时podoplanin表达阳性,这与未癌变处组织的免疫组化双染表达明显不同。4.统计学分析发现E-cadherin在OED和OSCC中着色部位的不同具有统计学意义(χ~2=13.348,P<0.0167),即在OED中多在细胞膜中表达,在OSCC中多呈细胞膜表达降低或阴性的现象;但在细胞质中的表达,三组之间并无显著的差异。结论1.采用免疫组化双染的方法联合检测E-cadherin和podoplanin在口腔鳞状上皮病变中表达,有助于不同鳞状上皮病变的病理诊断及鉴别。2.联合E-cadherin和podoplanin的免疫组化双染法可提高早期浸润性鳞状细胞癌及鳞状上皮不典型增生伴局灶癌变的确诊率。3.免疫组化双染的方法有助于协助临床病理医师更快速地定位可疑浸润区,提升诊断效率。