【摘 要】
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目的:探寻与gp96相互作用的HHV-6蛋白,并对其具体结合机制和对病毒蛋白影响进行详细研究。方法:本研究首先使用分子克隆技术构建目的蛋白真核表达质粒,通过质粒共转的方式,寻找与gp96相互作用的病毒蛋白。经过免疫共沉淀和蛋白质印迹实验,发现gp96与HHV-6 gB存在相互作用;并且通过同样实验验证HHV-6 gB与HSP90(gp96蛋白的细胞质同源物)间是否存在相互作用来验证gp96与gB的
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目的:探寻与gp96相互作用的HHV-6蛋白,并对其具体结合机制和对病毒蛋白影响进行详细研究。方法:本研究首先使用分子克隆技术构建目的蛋白真核表达质粒,通过质粒共转的方式,寻找与gp96相互作用的病毒蛋白。经过免疫共沉淀和蛋白质印迹实验,发现gp96与HHV-6 gB存在相互作用;并且通过同样实验验证HHV-6 gB与HSP90(gp96蛋白的细胞质同源物)间是否存在相互作用来验证gp96与gB的相互作用是否具有特异性。我们也通过构建gp96功能分区蛋白表达质粒,采用免疫共沉淀及蛋白质印迹实验确认gp96各功能分区是否与gB都存在相互作用。在HHV-6感染的HSB2细胞中,通过激光共聚焦显微镜观察确认gp96和gB是否存在共定位现象。通过蛋白表达质粒瞬时转染HEK-293T细胞,研究细胞及外泌体中gB表达变化,探究gp96蛋白与gB相互作用对gB表达的影响。结果:免疫共沉淀和Western Blot实验证明gp96蛋白与HHV-6 gB存在特异性相互作用。通过gp96功能分区蛋白表达质粒的构建及免疫共沉淀等实验确认gp96各功能分区都与gB有相互作用。在HHV-6A感染细胞中,两种蛋白在细胞内有共定位现象,同时gp96过表达时细胞中成熟gB的表达量明显降低,证明gp96蛋白影响gB的成熟。结论:gp96蛋白与HHV-6 gB存在特异性相互作用,gp96高表达会影响gB成熟。研究gp96与gB相互作用,进一步拓展了我们对宿主抗病毒机制的理解。此外,HHV-6 gB抗原/gp96蛋白佐剂的HHV-6疫苗的研发具有基础及临床的研究价值。
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