蛋白质巯基亚硝基化(S-nitrosation or S-nitrosylation)是一种重要的氧化还原相关蛋白质翻译后修饰。生物素转换法(biotin switch assay)建立之后便成为最普遍使用的检测蛋白质巯基亚硝基化的方法。我们发现还原过的牛血清白蛋白BSA在经过抗坏血酸盐处理后,生物素信号也会有明显升高。这表明,抗坏血酸盐处理导致的生物素信号升高不再是判断样品中亚硝基化存在的标准。在研究蛋白质分子间二硫键的过程中,我们发现在生物素转换法处理后的样品中,分子间二硫键会干扰蛋白质巯基亚硝基化的鉴定。使用生物素转换法纯化下来的亚硝基化靶点有可能只是与亚硝基化蛋白之间形成分子间二硫键的蛋白质。我们提出了不可逆生物素化方法(irreversible biotinylation procedures,IBP)的策略来改进原始生物素转换法:使用不可逆的生物素化标记试剂标记巯基亚硝基化的位点,并在亲和素纯化之前,使用还原试剂还原去除分子间二硫键。这样就可以完全排除分子间二硫键的干扰。我们进一步建立了基于IBP的蛋白质组学以及组学定量方法。我们的研究为蛋白质巯基亚硝基化领域今后的生物学功能研究打下了方法学基础。