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目的本研究旨在通过体外培养人结肠癌SW620细胞,利用分子生物学实验技术,以Wnt信号途径为中心,探讨生育三烯酚诱导结肠癌细胞发生死亡的分子机制。方法1.生育三烯酚对SW620细胞增殖的影响体外培养SW620细胞,分别加入不同浓度生育三烯酚(δ-生育三烯酚终浓度分别为0、1、2.5、5、10、15、20、25、30和40μmol/L；Υ-生育三烯酚终浓度分别为0、5、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90和100μmol/L)和乙醇(溶剂对照)作用24 h后,以MTT实验分别观察Υ-、δ-生育三烯酚对SW620细胞存活率的影响。分别以浓度为5、10、15、20μmo1/L的δ-生育三烯酚及15、30、45、60μmol/L的Υ-生育三烯酚和乙醇(溶剂对照)作用于细胞,利用荧光染色(AO/EB染色,DAPI染色)、电镜超微结构观察、流式细胞术、Caspase-3活性测定等方法检测细胞的死亡情况,并比较加入z.VAD.fmk与否时细胞的存活率2.生育三烯酚抑制SW620细胞增殖的机制研究体外培养SW620细胞,分别以浓度为5、10、15、20μmol/L的6-生育三烯酚及15、30、45、60-tmol/L的Υ-生育三烯酚和乙醇(溶剂对照)作用于细胞。24h后,提取细胞内总RNA进行Real-time RT-PCR检测wnt-1、β-catenin、cyclin D1、c-jun、MMP-7的mRNA表达。同时,提取总蛋白进行Westernblot检测上述蛋白的表达情况。结果1.Υ、δ-生育三烯酚分别作用24 h后,与乙醇对照组相比,各剂量组Υ-、6-生育三烯酚均可以使SW620细胞存活率降低(P<0.05),且细胞存活率分别随着Υ-、δ-生育三烯酚剂量的增加呈现降低的趋势。Υ-、6-生育三烯酚对SW620细胞的IC50值分别为31.35μmol/L,15.18μmol/L。2.通过细胞形态学观察发现,Υ-、δ-生育三烯酚分别作用SW620细胞6和24 h后,细胞内未见细胞核不规整,膜泡化,核染色体DNA浓缩、着边呈新月状,凋亡小体形成等典型的凋亡现象,取而代之的是细胞内出现大量空泡。电镜结果显示线粒体发生了肿胀及空泡变。3. Caspase抑制剂z.VAD.fmk加入后,SW620细胞生存率仍随着6-生育三烯酚的剂量增加而呈现下降的趋势(P<0.05),相同剂量组间细胞生存率的差异不具有统计学意义(P>0.05)；6-生育三烯酚分别作用SW620细胞6和24 h后,处理组细胞凋亡率与对照组比较,差异没有统计学意义(P>0.05)；6-生育三烯酚作用SW620细胞24 h后,随作用剂量的增加,Caspase-3活性并未增强(P>0.05)。Υ-生育三烯酚的结果与6-生育三烯酚的结果相类似。4.在不同剂量的δ-生育三烯酚作用24h后,SW620细胞内wnt-1、β-catenin的mRNA和蛋白的表达量下降；对Wnt信号途径下游癌基因cyclin D1、MMP-7的mRNA表达无影响,但是能够降低cyclin、D1、MMP-7蛋白量的水平。5.在不同剂量的Υ-生育三烯酚作用24h后,SW620细胞内(3-catenin、c-jun、cyclinD1的mRNA和蛋白表达量有不同程度的下降；对wnt-1、MMP-7的mRNA表达无影响,但可使其蛋白表达量有不同程度的下降。结论1.证实生育三烯酚抑制SW620细胞增殖。同时,发现δ-生育三烯酚对SW620细胞的抑制作用强于Υ-生育三烯酚。2.生育三烯酚可以诱导SW620细胞产生paraptosis样死亡3.生育三烯酚对Wnt信号途径的影响可能是其诱导SW620细胞paraptosis样死亡的机制之-。