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目的检测正常胃黏膜、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、异型增生及胃癌组织中Cripto-1和β-catenin蛋白的表达,分析两者表达的差异性和相关性,并探讨二者表达与胃癌发生和转移的关系及意义。方法临床病例资料收集及组织芯片制作：收集中国医科大学附属第一医院肿瘤外科手术切除胃癌标本192例(其中117例距癌灶边缘大于5cm处取配对正常胃黏膜作为对照),慢性萎缩性胃炎42例,肠上皮化生54例及异型增生25例。常规石蜡包埋,组织蜡块行4um组织切片,常规HE染色,用于目标组织的定位。采用组织芯片制作仪构建胃癌及癌前病变组织芯片蜡块,行4um连续切片。另取,32例新鲜原发胃癌组织及其配对远癌正常胃黏膜组织(距癌灶边缘大于5cm),术中切除后立即放入-80℃冰箱,保存备用。免疫组化染色及结果判定方法：采用PV-9000免疫组化二步法检测正常胃黏膜、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生及胃癌中Cripto-1和β-catenin蛋白的表达。鼠抗人Cripto-1单克隆抗体购自美国R&D公司,工作浓度为1：80,兔抗人β-catenin多克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司,工作浓度1：50,免疫组化及DAB显色试剂盒购自北京中杉生物有限公司。用PBS代替一抗做阴性对照。结果判定：Cripto-1和β-catenin蛋白在细胞浆呈现清晰棕黄色特异性免疫反应颗粒为阳性细胞。每一病例随机选择2个高倍镜视野,计数200个细胞,阳性细胞占计数同类细胞百分率<5%为0分,5%～25%为1分,26%～50%为2分,51%～75%为3分,>75%为4分。染色强度以阳性细胞呈色反应为准：无特异着色为0分,浅黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分；然后按染色强度和阳性细胞所占的百分比的乘积将结果分为：0分为阴性(—)；1～4分为弱阳性(+)；5～8分为中度阳性(++),9～12分为强阳性(+++)。蛋白免疫印迹与结果判定：分别取冻存的不同胃癌及正常胃黏膜组织各30mg,分别加入300ul裂解液。超声粉碎后置于冰上30min,12000r/min离心10min,取上清液经Bradford法定量组织蛋白。加入上样缓冲液变性,每孔50ug。制备SDS凝胶,加样后120V电泳。恒定电压100V下转膜2小时,室温封闭1小时。用TBST将Cripto-1一抗稀释至1:300,β-catenin一抗稀释至1：500,倒入已放好膜的孵育袋中4℃过夜。用TBST配制按1：10000配制二抗,室温下孵育2h,进行ECL发光。结果判定：采用凝胶成像分析系统对杂交条带进行半定量分析,蛋白含量以积分光密度值表示。每次检测时都检测β-actin内参蛋白,用Cripto-1或β-catenin蛋白与β-actin的比值作为目的蛋白相对表达水平。结果Cripto-1蛋白在慢性萎缩性胃炎(69.0%)、肠上皮化生(83.3%)、异型增生(80.0%)和胃癌组织(72.4%)中表达的阳性率均显著高于正常胃黏膜(47.9%),P<0.05；胃癌Lauren分型中,Cripto-1蛋白在肠型胃癌中的阳性表达率(84.0%)显著高于弥漫型胃癌(67.4%),P<0.05。中分化管状腺癌中Cripto-1蛋白阳性表达率(85.7%)显著高于低分化腺癌(63.5%),P<0.05。伴淋巴结转移胃癌组Cripto-1蛋白阳性表达率(76.6%)显著高于无淋巴结转移组(60.8%), P<0.05。Cripto-1表达与胃癌患者性别、年龄及胃癌大体分型无显著相关,P>0.05。Western blot实验结果显示,Cripto-1在胃癌组中的表达水平(95.19±29.68)显著高于正常胃黏膜组(78.044±29.02),t=2.338,P=0.023。β-catenin蛋白在慢性萎缩性胃炎(59.5%)、肠上皮化生(72.2%)、异型增生(64.0%)和胃癌组织(57.3%,)中表达的阳性率均显著高于正常胃黏膜(30.9%),P<0.01；肠上皮化生组中β-catenin蛋白的阳性表达率高于胃癌组,P<0.05。伴淋巴结转移胃癌组β-catenin蛋白阳性表达率(64.8%)显著高于无淋巴结转移组(51.7%), P<0.05。Lauren分型中β-catenin蛋白在肠型胃癌组中的阳性表达率(64.6%)高于弥漫型胃癌组中的表达率(51.7%),但未见统计学差异,P=0.07。β-catenin蛋白表达与胃癌患者性别、年龄、胃癌大体分型、WHO组织学分型及Lauren分型无统计学相关性,P>0.05。Western blot实验结果显示,β-catenin的表达水平在胃癌组(115.97±27.521)与正常胃黏膜组(105.95±23.353)间无统计学差异,t=1.571,P=0.122。192例胃癌组织中Cripto-1和β-catenin蛋白表达呈正相关,等级相关系数,rk=0.220,P<0.001。结论Cripto-1与β-catenin蛋白在胃癌前病变及胃癌组织中的阳性表达率均显著高于正常胃黏膜,提示二者可能作为致癌因子参与了胃癌的发生。Cripto-1与β-catenin蛋白表达与代表胃癌恶性生物学行为的淋巴结转移密切相关,提示二者在胃癌的预后判断中可能有重要价值。另外,Cripto-1与β-catenin蛋白在胃癌中的表达呈正相关,提示二者可能协同参加了胃癌的发生发展,但其具体分子机制尚需进一步深入研究。