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研究背景:结核病(Tuberculosis,TB)是由于结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的慢性传染病,目前在全球范围仍然是最常见和最严重的传染病之一。CD4+T,CD8+T和γδT细胞在抗MTB感染的免疫过程中起了重要作用。T细胞分为初始型T细胞(Tnaive),中央记忆型T细胞(Tcm),效应记忆型T细胞(Tem)和效应型T细胞(Teff)。Tcm可以归巢到次级淋巴组织,产生大量细胞因子IL-2,少量其他效应分子。Tem产生大量效应性细胞因子,发挥快速的效应功能,并进入外周组织。Teff则产生效应性细胞因子,并发挥细胞毒效应。Vγ9Vδ2 T细胞在人外周血中占大多数,根据其表面表达的分子及效应功能,也可分为初始型,记忆型及效应型等免疫亚型。但肺TB患者外周血不同T细胞亚群中免疫记忆性细胞亚型的数量有何变化尚少报导。目的:观察和分析肺TB患者外周血不同T细胞亚群中免疫记忆性细胞亚型的变化。方法:1.采集健康成人及肺TB患者外周血,加入荧光标记单抗进行表面分子染色(anti-CD45RA-FITC,anti-TCRγδ-APC-Vio770,ani-CD4-APC-Vio77,anti-CD27-APC,anti-Vδ1-PE,anti-Vδ2-Per CP,anti-CD8-PE-Cy7,anti-CD3-BV421,anti-CD27-BV510)。通过CD45RA和CD27将不同T细胞亚群(CD4、CD8、Vδ1、Vδ2和Vδ3-8)中免疫记忆性亚型细胞分为Tnaive(CD45RA+CD27+),Tcm(CD45RA—CD27+),Tem(CD45RA—CD27—)和Teff(CD45RA+CD27—)。流式细胞仪检测不同T细胞亚群中的免疫记忆性亚型细胞的分布百分率,比较健康成人和肺TB患者之间的差异。2.采集健康成人及肺TB患者外周血,加入佛波醇酯(PMA)和钙离子霉素(Ionomycin)培养2小时后,再加入莫能霉素(Monensin)继续培养4小时,收集细胞,加入荧光标记单抗进行表面分子和胞内染色(anti-CD45RA-FITC,anti-TCRγδ-APC-Vio770,ani-CD4-APC-Vio77,anti-CD27-APC,anti-Vδ1-PE,anti-Vδ2-Per CP,anti-CD8-PE-Cy7,anti-CD3-BV421,anti-CD27-BV510,anti-IL-17-APC,anti-IFN-γ-APC)。通过CD45RA和CD27将产IL-17或IFN-γ的不同T细胞亚群(CD4、CD8、Vδ1、Vδ2和Vδ3-8)中免疫记忆性亚型细胞分为Tnaive(CD45RA+CD27+),Tcm(CD45RA—CD27+),Tem(CD45RA—CD27—)和Teff(CD45RA+CD27—)。流式细胞仪检测产IL-17或产IFN-γ的αβT和γδT细胞亚群中记忆型免疫亚型细胞的分布比例,比较健康成人和肺TB患者之间的差异。结果:1.健康成人和肺TB患者外周血中CD4+T细胞中的Tnaive分别为57.53±13.59和36.49±17.65,(P<0.01);Tem分别为6.03±3.26和24.44±10.76,(P<0.01);Teff分别为3.26±4.09和0.75±0.58,(P<0.01)。健康成人和肺TB患者的CD8+T细胞Tnaive分别为63.33±16.63和24.53±17.58,(P<0.01);Tem分别为6.56±4.25和39.38±18.31,(P<0.01);Teff分别为14.60±11.75和24.83±12.90,(P=0.03)。健康成人和肺TB患者的CD4+和CD8+T细胞的Tcm之间无统计学差异,(P>0.05)。2.健康成人与肺TB患者外周血中Vδ1 T细胞和Vδ3-8 T细胞(γδTCR+Vδ1—Vδ2—T细胞)的免疫记忆性亚型细胞的百分率没有统计学差异。健康成人和肺TB患者外周血中Vδ2 T细胞的Tcm分别为77.90±10.60和61.05±22.98,(P=0.048);Teff分别为2.00±2.21和5.24±2.30,(P<0.01);而Tnaive和Tem的百分率两组人群间没有统计学差异。3.健康成人和肺TB患者外周血中产IFN-γ的CD4+T细胞的Tem的百分率分别为16.22±3.02和27.33±14.34,(P=0.029);两组人群中Tnaive、Tcm和Teff的百分率无统计学差异。健康成人和肺结核患者外周血中产IFN-γ的CD8+T细胞的Tcm百分率分别为48.99±13.72和33.66±14.49(P=0.035);Teff分别为19.57±11.67和42±13.52,(P=0.002),其余免疫记忆性亚型细胞的百分率无统计学差异。4.健康成人和肺TB患者外周血中产IFN-γ的Vδ1 T细胞中Tnaive的百分率分别为32.03±19.58和14.86±9.98,(P=0.039);Teff的百分率分别为42.92±28.48和72.58±18.76,(P=0.022);两组人群中其余免疫记忆性亚型细胞的百分率无统计学差异。产IFN-γ的Vδ2 T细胞免疫记忆性亚群细胞的百分率两组人群间没有统计学差异。产IFN-γ的Vδ3-8 T细胞的Tcm的百分率分别为57.51±19.87和36.13±21.43,(P=0.044),其余免疫记忆性亚型细胞的百分率两组人群间无统计学差异。5.健康成人和肺TB患者外周血中产IL-17的CD4+和CD8+T细胞的不同免疫记忆性亚型细胞的百分率之间没有统计学差异。结论:1.肺TB患者外周血中αβT和γδT细胞的CD4+T,CD8+T以及Vδ2 T亚群的免疫记忆性亚型细胞的分布发生改变。此外,肺TB患者外周血产IFN-γ的αβT和γδT细胞亚群,除Vδ1,Vδ3-8亚群免疫记忆性亚型细胞的分布也发生改变。这一变化可能与机体抗Mtb感染的免疫应答有关,且其改变可能具有保护作用。2.肺TB患者外周血中产IL-17的αβT细胞(CD4+和CD8+T细胞)的免疫记忆性亚型细胞的分布与健康成人没有差异,提示Mtb的感染不能改变其免疫亚型的分布比例。