一种微孔板生物毒性快速检测技术的建立

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本研究建立了一种利用多种微生物急性毒性快速检测技术TOXPlate,其主要原理是将受试微生物暴露于一系列梯度浓度的样品,应用2,3,5-氯化三苯基四氮唑盐(triphenyl tetrazolium chloride,TTC)作为指示剂检细胞在毒物胁迫下的生长抑制效应,生长抑制程度由细胞还原TTC的量所决定。  以环境工程菌种库中的菌种资源为基础,测试各菌株对若干种化学物质的反应,并根据反应的灵敏度、与TTC作用的稳定性、受试生物种类的多样性等原则,筛选出11株受试微生物作为受试生物,其中10株属于原核生物,1株为真核生物(酵母),它们分别是:Comamonas testosterone, Brevibacterium epidermidis,Staphylococcus sciuri,iaphorobacter nitroreducens,Brevundimonas diminuta,Pseudomonas Sp., Ochrobactrumanthropi, Citrobacter freundii,Pantoeaagglomerans,Enterococcus casseliflavus,Saccharomyces cerevisiae。  对试验的TTC浓度和接种生物量进行了优化。不同浓度TTC对微生物的作用的研究表明,受试生物不同,对TTC的敏感程度也不同,受试菌株在TTC浓度为0.005%-0.01%之间时与TTC反应较好,最终确定TOXPlate试验TTC浓度为0.01%。  用TOXPlate检测几种化学物质的急性毒性,并计算MTC(Microbial ToxicConcentration)。结果表明TOXPlate与MARA、发光细菌、大肠杆菌抑制试验等微生物试验的灵敏度比较接近。11株试验微生物对各种不同化学物质的反应显示,试验结果较为稳定,均MTC的变异系数CV远小于20%。
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