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目的建立电子射线放射性损伤的颌下腺细胞模型,使用免疫荧光染色鉴定细胞,使用乌梅甘草喷雾剂对造模损伤后的SMG(Submandibular gland cells)进行干预,然后采用MTT(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide)法测定细胞总增殖率,利用流式细胞技术和激光共聚焦技术,检测SMG凋亡率和凋亡形态的改变,从而探究乌梅甘草喷雾剂对SMG细胞的修复效果。方法实验一:大鼠乳鼠由广州中医药大学(大学城)实验动物中心统一提供,SCXK(粤)2013-0034。乳鼠为0~3日龄,共10只,采用75%酒精浸泡消毒后,在超净台内钝性分离出双侧颌下腺组织,采用0.2%的Ⅱ型胶原酶消化30分钟,过滤离心重悬,种于25cm~2的培养瓶备用。将P3代SMG细胞种植于96孔板,分为模型组、空白组,每组设置10个复孔。模型组分别给予0.1Gy、0.2Gy、1Gy、2Gy、4Gy。(射线类型为:X电子射线,能量为9兆伏,剂量率为3Gy/分钟,跳数分别为:12 MU、24 MU、120 MU、240 MU、480 MU),将96孔板暴露于25×25cm的照射野下,放射源到96孔板内液面高度为100cm。造模24小时后观察细胞形态变化和总增殖率的变化,判断放射性SMG细胞模型是否建立成功。实验二:确定最佳电子射线剂量后,将P3代SMG细胞种植于96孔板,随机分为乌甘组、模型组、空白组。乌甘组给予0.1Gy的电子射线损伤后(具体照射方法同实验一)给予不同浓度梯度的乌梅甘草液(500ug/ml、50ug/ml、5ug/ml、0.5ug/ml),模型组电子射线损伤后不给药,空白组不给予射线损伤也不给药。乌甘组造模后给药,24小时候观察SMG细胞形态,并用MTT法测定总增殖率,流式细胞仪和激光共聚焦检测凋亡率和凋亡形态的改变。结果实验一结果:模型组0.1Gy组的SMG细胞镜下变异形态较少,漂浮细胞数量少,视野下较清晰。其他组别SMG细胞镜下观察到细胞密度明显降低,死亡漂浮细胞增多,细胞固缩变形增多,视野较混浊。0.1Gy组的细胞存活率率高于其他组别,差异具有统计意义(p<0.05),且0.1Gy组的细胞存活率接近与空白组的50%,差异具有统计意义(p<0.05)。实验二结果:放射性损伤后48小时,乌甘组镜下细胞密度增多,细胞形态大多呈现铺路石状展开,镜下漂浮死亡细胞明显减少;乌甘组的总增殖率明显高于模型组,差异具有统计意义(p<0.05)。流式细胞仪检测其凋亡率,发现乌梅甘草具有明显抑制SMG细胞凋亡率的发生,相对于模型组具有统计差异(p<0.05);激光共聚焦结果显示,乌甘组发生凋亡形态的细胞数量少于模型组。结论大鼠颌下腺细胞在接受直线加速器电子射线0.1Gy照射后,放射性颌下腺损伤的体外细胞模型建立成功。乌梅甘草喷雾剂对其干预24小时后,放射性损伤的SMG细胞总体增殖率明显提高,且其凋亡率亦明显低于模型组,SMG凋亡形态也呈现改善趋势。