氯化锂抑制GSK-3β对奥曲肽作用于Wnt/β-Catenin通路的影响

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目的研究氯化锂抑制GSK-3β活性后,生长抑素类似物奥曲肽对结肠癌SW480细胞Wnt/β-Catenin信号传导通路抑制作用的变化,以进一步明确GSK-3β在生长抑素抑制Wnt/β-Catenin通路中的作用。阐明生长抑素的抗肿瘤机制,为寻找具有开发前景的Wnt信号通路候选药物提供实验和理论依据。方法以SW480细胞为实验对象,设置对照组、奥曲肽低浓度组(10-10M)、奥曲肽高浓度组(10-6M)、LiCl组、奥曲肽低浓度+LiCl组(10-10M+20mM)、奥曲肽高浓度+LiCl组(10-6M+20mM),共六个组,分别定为A、B、C、D、E、F组。Western blot方法测定各组细胞Wnt/β-Catenin信号传导通路中关键因子β-Catenin、pβ-Catenin及下游靶基因C-myc、CyclinD1蛋白表达,以明确奥曲肽是否通过上调GSK-3β蛋白的活性,从而抑制该信号通路的作用。结果1.奥曲肽(10-6、10-10M)对SW480细胞β-Catenin, c-myc, cyclin D1蛋白表达有明显抑制作用,对pβ-Catenin蛋白表达有明显上调作用,与对照组比较差异有显著性(P<0.05)2.与单用奥曲肽(10-6M、10-10M)相比,奥曲肽高浓度+LiCl组及低浓度奥曲肽+LiCl组SW480细胞中的β-Catenin蛋白表达上调,pβ-Catenin蛋白表达下调,差异有显著性(P<0.05)。与对照组比较,奥曲肽+LiCl组SW480细胞β-Catenin蛋白、pβ-Catenin蛋白无显著性差异(P>0.05)。3.与单用奥曲肽(10-6M、10-10M)相比,奥曲肽高浓度+LiCl组及奥低浓度曲肽+LiCl组SW480细胞中的c-myc, cyclin D1蛋白表达上调,差异有显著性(P<0.05);与对照组比较,奥曲肽+LiCl组SW480细胞c-myc, cyclin D1蛋白无显著性差异(P>0.05)。提示LiCl抑制了奥曲肽对Wnt/β-Catenin信号传导通路的作用。结论1.奥曲肽能抑制结肠癌SW480细胞Wnt/β-Catenin信号通路,可使β-Catenin及下游靶基因蛋白表达下调,pβ-Catenin蛋白表达上调。2.氯化锂可抑制奥曲肽对结肠癌SW480细胞Wnt/β-Catenin信号通路的作用,提示奥曲肽对Wnt/β-Catenin信号通路的抑制作用与其增强GSK-3β的活性有关。
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