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目的:在体内外炎性环境中,探究去甲斑蝥素对铁代谢的影响,阐明去甲斑蝥素可能通过调节hepcidin以及其他与铁代谢相关重要蛋白影响机体铁代谢,并且初步探究去甲斑蝥素影响hepcidin表达的分子机制,为拓宽去甲斑蝥素的临床应用提供理论基础。方法:1.CCK-8法检测并分析去甲斑蝥素对小鼠腹腔巨噬细胞活力的影响;2.通过real-time PCR实验研究去甲斑蝥素作用下巨噬细胞和balb/c小鼠肝、脾、十二指肠中IL-6和hepcidin mRNA的表达情况;3.通过western bolt检测去甲斑蝥素作用下小鼠腹腔巨噬细胞和balb/c小鼠肝、脾、十二指肠中铁代谢相关蛋白TfR1、DMT1、Fpn1、Ferritin-L、IRP1以及通路蛋白P-JAK2和P-STAT3表达的影响;4.采用免疫荧光染色法检测去甲斑蝥素对balb/c小鼠肝、脾、十二指肠中铁代谢相关蛋白TfR1、DMT1、Fpn1、Ferritin-L、IRP1的影响;5.铁试剂盒分别检测去甲斑蝥素作用后组织铁含量以及血清铁含量(SI)、不饱和铁铁结合力(UIBC)和转铁蛋白饱和度(TF%saturation)。结果:1.细胞活性实验结果表明,当细胞活性不受影响时,去甲斑蝥素的最大给药浓度为10μM;2.Real-time PCR实验结果显示,LPS(1μg/ml)作用RAW264.7细胞6 h以及小鼠腹腔注射LPS(1 mg/kg)6 h后,与对照组相比,IL-6和hepcidin mRNA的表达在RAW264.7细胞和小鼠肝、脾、十二指肠中均明显升高,而去甲斑蝥素可以显著抑制LPS引起的急性炎症环境中hepcidin的高表达。3.Western bolt实验结果说明,LPS(1μg/ml)作用RAW264.7细胞6 h后,与对照组相比,铁代谢相关蛋白TfR1、DMT1、Fpn1的表达降低,而Ferritin-L和IRP1表达升高,通路蛋白P-JAK2和P-STAT3的表达升高,去甲斑蝥素(10μM)可以逆转LPS的作用;小鼠腹腔注射LPS(1mg/kg)6 h后,铁代谢相关蛋白TfR1、DMT1、Fpn1、IRP1在小鼠肝、脾、十二指肠中的表达均降低,而铁储存蛋白Ferritin-L以及通路蛋白P-JAK2和P-STAT3的表达升高,连续小鼠腹腔注射去甲斑蝥素(2 mg/kg)3天后,可以纠正LPS作用下的铁代谢失衡。4.免疫荧光染色法结果显示,与对照组相比,小鼠腹腔注射LPS(1mg/kg)6h后,小鼠肝、脾、十二指肠中铁代谢相关蛋白如铁输入蛋白TfR1、DMT1、铁输出蛋白Fpn1和铁调节蛋白IRP1呈低表达状态,铁储存蛋白Ferritin-L以及通路蛋白P-JAK2和P-STAT3的表达升高,连续小鼠腹腔注射去甲斑蝥素(2mg/kg)3天后,可以明显抑制LPS的作用,即铁输入蛋白TfR1、DMT1、铁输出蛋白Fpn1和铁调节蛋白IRP1的表达升高,铁储存蛋白Ferritin-L以及通路蛋白P-JAK2和P-STAT3的表达升高。5.对小鼠组织铁、血清铁含量进行检测,结果表明小鼠腹腔注射LPS(1mg/kg)3天后,与对照组相比,小鼠肝、脾、十二指肠中铁含量升高、血清铁(SI)含量明显下降,血清转铁蛋白饱和度(TF%saturation)明显下降。去甲斑蝥素连续腹腔注射3天后,小鼠肝、脾、十二指肠中铁含量明显下降,血清铁含量升高,但不饱和铁结合力没有明显差异。结论:去甲斑蝥素可以通过调节hepcidin及其他重要蛋白,改善炎症环境下的铁代谢紊乱,初步机制探究结果表明:去甲斑蝥素可以通过IL-6/JAK2/STAT3这条通路对hepcidin的表达进行调控。