论文部分内容阅读
目的：从古代文献研究、临床研究和基础研究三个方面,探讨类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)的“血瘀”病机及其分子基础。方法：1.运用文献研究的方法,对中医古籍中与RA病因描述相关的文献进行初步整理,选取“痹证”、“历节病”、“风湿”、“鹤膝风”、“白虎病”作为检索词筛选相关文献,然后再按含有“痹、瘀、涩、凝滞、不通、积聚、麻木、不利、疼痛”与瘀相关的描述进一步筛选,对检索出的条文进行分析,从历代医家对RA病因的认识来探讨RA血瘀的病机。2.收集广东省中医院住院RA患者(n=168)的临床四诊信息,用因子分析的方法进行分析,提取公因子并测量症状载荷,明确公因子对应的证候,以揭示广东省中医院住院RA患者中医证候的特点。并进一步参考血瘀证最新的诊断标准,分析RA每个证候与血瘀病机的相关性。3.以治疗RA的经典中西药物为工具,探讨RA血瘀病机的分子基础。先用肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor, TNF)-α诱导RA成纤维样滑膜细胞(MH7A),构建RA体外模型,再用治疗RA的经典药物甲氨蝶呤(MTX)及盐酸青藤碱(SIN)分别作用于MH7A细胞,以MTS的方法检测MTX及SIN对MH7A细胞增殖的影响和作用的最适工作浓度及最适工作时间。以Western blotting的方法检测不同浓度MTX及SIN对血瘀标志物血栓素合酶(Thromboxane synthase, TxAS)和细胞增殖与迁移标志物α辅肌动蛋白-1(α-actinin-1, ACTN1)表达的影响。实验以检测环氧酶(Cyclooxygenase, COX)-2蛋白表达作阳性对照。最后,选取RA临床常见三个中医证型(湿热痹阻、寒湿痹阻、肝肾不足)患者的关节滑膜组织,以Western blotting的方法检测TxAS、ACTN1蛋白在RA不同证型滑膜中表达的差异。结果：1.古文献研究：古代文献学研究共挑选出42条较为相关的条文,进一步按内因、外因、不内外因分析得出,引起RA的多种病因均可导致血瘀的产生,而血瘀可出现于RA各期。初期多表现为外因(风、寒、湿、热邪等)致瘀,外邪痹阻经脉,气血运行受阻。疾病进展,则出现内因(虚虚实实等)致瘀,或气血阴阳亏虚,无以养血、行血；或痰瘀互生,痰阻经络；日久牵延则久病入络,气血周流不畅。尚可见外伤、情志、冲任失调等致瘀原因。2.临床研究：通过因子分析的方法,从RA患者的38个症状中共提取出15个公因子,其中11个具有代表性的公因子分别对应RA寒湿痹阻、湿热痹阻、肝肾不足三个临床上最常见的证候。进一步参考血瘀证的诊断标准进行分析,发现RA的三个常见证候中均包含血瘀的相关症状。3.基础研究：(1)MTS结果显示,50μg/ml、200μg/ml、400μg/ml的MTX及SIN作用24h、48h、72h均能抑制MH7A细胞的增殖,与对照组相比有显著差异(P<O.05),其中以4OOμg/ml的SIN作用72h后抑制效果最为显著；(2)MH7A细胞的Western blotting结果显示,MTX及SIN均能抑制TxAS、ACTN1、COX-2的表达,在TNF-α诱导模型组里效果更加显著；COX-2、ACTN1及血瘀生物标志物TxAS在TNF-α诱导模型组里的表达均高于对照组；TxAS、ACTN1、COX-2的表达趋势具有一致性；(3)RA滑膜组织的Western blotting结果显示,TxAS和ACTN1在寒湿痹阻证和肝肾不足证高表达,且它们的表达趋势一致。结论：1.RA发病的多种病因均可致瘀,血瘀是RA的一个基本病机,且贯穿于RA发病的始终。2.寒湿痹阻、湿热痹阻、肝肾不足是广东省中医院住院RA患者的常见证候,三者均与血瘀相关,支持“血瘀”是贯穿于RA不同证型的病机证素。3.TxAS可以被经典抗风湿药物MTX和SIN所调节,且与RA滑膜细胞增殖与侵袭的标志物ACTNl表达一致,说明TxAS可能是RA血瘀病机的分子基础之一。