豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)CB101在胶体几丁质诱导下产生多种分子量不同的几丁质酶，其中分子量最大的一个几丁质酶Chi1(约91.5kDa)的编码基因已经被克隆。几丁质酶Chi1共具有四个保守结构域，从N端开始依次为ChiN结构域、糖苷水解酶家族18催化区结构域(Catalytic domain)、功能未知区域A和几丁质结合区结构域(ChBD，包括两个串连重复的几丁质结合区)，几乎包含了几丁质酶中所有常见结构域，为我们研究几丁质酶不同结构域的功能提供了良好的材料。为研究CB101分泌的几个分子量不同的几丁质酶，我们构建了CB101基因组的cosmid文库，将文库涂布于1％的胶体几丁质功能平板上进行功能筛选，从中筛选到9个产几丁质酶的克隆子，用基因Chi1不同区域的三对特异引物进行PCR验证，同时构建缺失Chi1催化区的突变株(命名为CB101Δchi1)，酶活测定结果显示该突变株无几丁质酶活。另外我们用5种不同的限制性内切酶对CB101及CB101Δchi1总DNA进行完全酶切，用chi1催化区上的一段430bp的核苷酸片段作探针，Southern杂交验证了CB101染色体基因组上Chi1是单拷贝的，分析表明这9个克隆子包含的几丁质酶基因都是chi1。另外本文报道从CB101发酵液经硫酸铵盐析,DEAE-纤维素柱层析和MonoQ离子交换柱层析，分离纯化出其中一个分子量约为60kDa的几丁质酶。蛋白N末端氨基酸序列的测定结果表明该酶是Chi1剪缺掉N末端信号肽部分、C末端A区结构域和两个几丁结合区结构域的产物。基因克隆和蛋白分离、纯化实验都暗示CB101的几丁质酶系统只包含一个几丁质酶基因。