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目的:棉酚在动物体内蓄积到一定的程度,对动物机体产生中毒危害现象,从而影响生长发育和繁殖能力饲喂棉籽壳后检测对雄性细毛羊的精液品质;分离出睾丸细胞,在体外进行培养,加入不同梯度棉酚对细胞的影响,查明在什么剂量下棉酚诱导细毛羊睾丸间质细胞发生凋亡和产生细胞毒性作用。方法:本论文分两大部分,第一部分做棉酚对细毛羊睾丸间质细胞的影响研究,具体通过:1,细毛羊睾丸间质细胞的分离培养和鉴定。2,MTT法检测棉酚对睾丸间质细胞的增值的抑制作用。3,细毛羊睾丸间质细胞经棉酚处理对乳酸脱氢酶和Na-K-ATP酶的影响。4,Heochst33342/PI试剂盒检测对细毛羊睾丸间质细胞的影响。5,凝胶电泳检测DNA Ladder。6,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。第二部分做饲喂棉籽壳(含有不同浓度的游离棉酚)对细毛羊精液品质的影响研究。结果:MTT法检测棉酚对睾丸间质细胞的增值的抑制作用,1,左旋棉酚的作用:睾丸间质细胞增值随着棉酚浓度的增加及作用时间的延长而明显变化。256、512mg/l左旋棉酚作用24小时后能显著抑制间质细胞的增值(P<0.5),作处理48小时64、128、256、512mg/l能显著抑制间质细胞的增值(P<0.5),处理72小时只有512mg/l起到显著抑制作用。2,消旋棉酚的作用:处理时间段也分三个,24、48、72,只有48小时64、128、256、512mg/l浓度的消旋棉酚对细毛羊睾丸间质细胞起到显著的抑制作用(P<0.5),其他两个时间段都没有显著作用,但从数据上看,也起到一定的抑制作用。左旋棉酚和消旋棉酚接触细胞24h后,高浓度组棉酚对细胞内Na-K-ATP酶影响差异显著(P<0.05)。Heochst33342/PI试剂盒检测结果,不同浓度消旋棉酚对睾丸间质细胞处理48小时后,随着棉酚的浓度的增加,坏死细胞的数量也跟着增加。凝胶电泳检测DNA Ladder,经不同浓度的消旋棉酚处理72小时后,提取DNA进行电泳分析。可见1%DMSO对照组及消旋棉酚处理组的细胞没有出现梯状带型,但256mg/l、512mg/l组得基因组DNA含量明显高于低剂量组(P<0.05)。流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。消旋棉酚作用于新疆细毛羊睾丸间质细胞后观察到细胞周期改变,主要表现为S期细胞减少,G0/G1期细胞比例增加。256mg/l消旋棉酚作用48h时可见S期细胞比例明显降低,同时G0/G1期细胞比例明显增加,细胞进入增殖期减少,DNA合成速度减慢,细胞被阻滞于G0/G1期。64mg/l消旋棉酚作用48h同样出现上述改变,而4mg/l消旋棉酚对细毛羊睾丸间质细胞的周期没有明显影响。醋酸棉酚在抑制细毛羊睾丸间质细胞生长增殖同时观察到上述细胞周期改变,其抑制间质细胞增殖的机制可能与对间质细胞细胞周期的调控作用有关。第二部分做棉酚对细毛羊精液品质的影响研究,实验一组即饲喂0.5kg棉籽壳(含游离棉酚218mg)和试验二组即饲喂1kg棉籽壳(含游离棉酚436mg)公羊的精子活力,活精子率,pH值,与对照组(不喂棉籽壳)相比都有降低,但试验一组与对照组差异不显著(P>0.05),试验二组与对照组差异显著(P<0.05)。而在射精量,精子密度两指标上试验一组都高于对照组和试验二组,特别是在精子密度上,试验一组显著高于对照组和试验二组(P<0.05)。结论:不同浓度及不同时间消旋棉酚和左旋棉酚对新疆细毛羊睾丸间质细胞的作用后的数据来看,消旋棉酚和左旋棉酚能抑制细胞的生长存活,且抑制作用与药物存在浓度和时间有依赖关系。对种用羊最好不用棉籽壳饲喂,对于肉用或者其他用途的细毛羊,日添加量最好不要超过0.5kg,保证原料的多样性。