基于核酸适配体的肿瘤细胞高灵敏电化学检测

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恶性肿瘤严重威胁着人类的健康,其致死的主要原因是肿瘤细胞可以从原发位点脱离,进入血液或淋巴循环,形成循环肿瘤细胞(Circulating tumor cells,CTC),并在别处形成新的肿瘤位点。由于循环肿瘤细胞在生理样本中含量低,样本复杂度高,难以在早期被检测出来,延误了最佳治疗时机,所以提高检测的灵敏度以降低假阴性,增强特异性以降低假阳性尤为重要。核酸适配体是通过体外筛选得到的寡核苷酸片段,可以和相应的配体高特异性、高亲和性地结合;而电化学检测具有快速简便、灵敏度高等优点。本论文主要研究了利用肿瘤细胞特异性的核酸适配体修饰电极,并通过逐步优化,显著降低了检测的背景值,提高了灵敏度,实现了对肿瘤细胞高特异性、高灵敏的快速检测。首先将BNL1MEA.7R.1(MEAR)肝癌细胞特异的核酸适配体TLS1c由T15寡核苷酸连接分子(ss linker)共价修饰到玻碳电极表面,利用循环伏安法(CV)、差分脉冲伏安法(DPV)及交流阻抗法(EIS)对MEAR细胞进行检测。结果显示,TLSlc可以有效的修饰到电极表面,实现对MEAR细胞特异性检测。为了降低检测背景值,我们首先对检测样品进行了预处理:将外周血离心处理,去除血浆,降低样本复杂度。然后将TLS1c由双链连接分子(ds linker)共价修饰到电极表面。相比于ss-TLS1c修饰电极,ds-TLS1c修饰电极显著的降低了检测的背景值,提高了检测的灵敏度。此外,利用DPV对不同数目的肿瘤细胞进行检测。结果表明,DPV的峰电流随阳性细胞数量的增加而增加。峰电流值与阳性细胞数量呈现很好的线性关系,可以实现对肿瘤细胞的定量检测。为了进一步提高捕获肿瘤细胞的机会,将两个特异识别MEAR细胞的核酸适配体TLS1c和TLS11a分别由单链和双链连接分子双修饰到电极表面。结果表明,ss-TLS1c/ds-TLS11a双修饰电极具有最低的背景值和最好的检测限。在1mL含有109个全血细胞中,可以实现对低至一个MEAR细胞的痕量检测。
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