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猪塞内加谷病毒(Seneca Valley virus,SVV)属于小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)Senecavirus病毒属成员,可引起猪鼻镜及蹄冠处出现水疱、溃烂创面从而导致跛足甚至死亡。本研究采用传代细胞(猪肾细胞)从猪组织器官研磨物中分离出4株SVV,分别命名为SVV CH-01-2015、SVVCH-02-2015、SVV CH-03-2015、SVV CH-04-2015。并对4株SVV中国分离株进行全基因组序列测定。根据发表在GenBank SVV保守序列3C基因,设计特异性引物和探针;构建含3C基因序列的重组质粒作为阳性标准品,建立针对SVV检测的TaqManReal-Time PCR检测方法。将SVV细胞分离株攻毒4日龄健康仔猪,观察临床症状、病理变化,检测感染动物组织器官中的病毒载量。病毒分离鉴定结果表明:病毒分离液在第一代24h后即可产生CPE,随着传代次数的增加,出现CPE的时间缩短,细胞病变程度亦随之加剧,且可在PK-15细胞上稳定增殖。全基因组序列比对结果表明,SVV CH-01-2015与SVV CH-02-2015、CH-03-2015、SVV CH-04-2015的相似性为97.6%;SVV CH-02-2015与SVV CH-03-2015、SVV CH-04-2015的相似性为99.9%;SVV CH-03-2015与SVV CH-04-2015的相似性为100%。4株SVV中国分离株与2008年美国分离株SVV-001相比,相似性为94.3%-94.4%之间;SVV CH-01-2015与2015年美国新分离株USA/IA46008/2015和USA/IA40380/2015相似性均为96.8%;SVV CH-02-2015、SVV CH-03-2015、SVV CH-04-2015与2015年美国新分离株USA/IA46008/2015和USA/IA40380/2015相似性均为98.0%;SVV CH-01-2015与2015年巴西新分离株SVV/BRA/GO3/2015、SVV/BRA/MG1/2015、SVV/BRA/MG2/2015相似性均为97.1%;SVV CH-02-2015、SVV CH-03-2015、SVV CH-04-2015与2015年巴西新分离株SVV/BRA/GO3/2015、SVV/BRA/MG1/2015、SVV/BRA/MG2/2015相似性均为98.2%;SVV CH-01-2015与SVV CH-03-2015、SVV CH-04-2015与加拿大株11-55910-3相似性均为96.7%;SVV CH-02-2015与加拿大株11-55910-3相似性均为96.6%。4株SVV中国分离株均位于Senecavirus病毒属,与Senecavirus病毒属毒株同源性最高,由此可以确定所分离到的4株均属于Senecavirus病毒属。TaqMan Real-Time PCR检测方法的结果显示,TaqMan Real-Time PCR用标准品所构建的标准曲线相关系数(R2)达到0.999以上;可以检测到标准品下限浓度为1×102copies/μL;只以SVV的cDNA为模板的反应呈现阳性荧光信号,而以其它病毒的cDNA/DNA为模板所进行的Real-Time PCR均未检测到阳性荧光信号;组内与组间试验的变异系数均在0.96以下。本研究建立的TaqMan Real-Time PCR方法灵敏度高,特异性强,重复性好。TaqMan Real-Time PCR检测方法的成功建立,为SVV的定性检测和定量分析提供了有效的技术平台。动物致病性试验结果表明:(1)运用人工感染方式成功在4日龄仔猪身上发现临床症状和病理变化,证明SVV对仔猪具有致病性。(2)通过同居感染处理证明SVV可能是一种接触传染病且传播速度较快。(3)SVV可在4日龄仔猪内体成功复制且病毒可能在肺、脾、扁桃体、脑部和心脏中成功复制。