瓜尔豆花药离体培养研究

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关于瓜尔豆花药培养国内外尚无相关报道.鉴于此情况,该文着重研究了瓜尔豆花药培养过程中小孢子发育时期、供体植株基因型和生长环境、培养基成分、预处理和接种密度等因素对愈伤组织形成的影响,并对愈伤组织诱导再分化进行了初探,以期为后期试验奠定坚实的理论和实践基础.合适的小孢子发育时期是花药培养成功开始的关键.该文通过研究确定花蕾纵径作为瓜尔豆小孢子发育时期的判断指标;花蕾横径和纵横径比作为辅助指标.研究中还发现,瓜尔豆同一花序上各花蕾的小孢子发育时期不同,相邻花蕾的小孢子发育时期存在差异.随后的试验表明小孢子发育处于单核前中期的花药较容易形成愈伤组织.关于大豆的花药培养已经有许多报道.借用大豆花药培养成功的培养基进行了瓜尔豆花药培养,结果表明MB<,1>和SAC<,3>较适合瓜尔豆花药培养.将花蕾先在1~2℃低温下预处理24h后再接种培养,有利于花药愈伤组织高诱导率的获得.NAA和2,4-D都利于瓜尔豆花药愈伤组织的形成,其中NAA效果优于2,4-D,IBA的作用不明显.2,4-D在低浓度时促进愈伤组织形成,但高浓度(8.0mg/L)时愈伤组织诱导率呈明显的下降趋势.NAA在4.0~8.0mg/L范围都有利于愈伤组织形成,但此范围内差异不显著.蔗糖和葡萄糖对瓜尔豆花药培养愈伤组织形成都有促进作用,但蔗糖效果优于葡萄糖,且以70~80g/L效果最好.大田花药较温室花药易于形成愈伤组织.在供试的五个基因型中,以SU-B3和SU-B5愈伤组织诱导率高于其它品系.花药接种密度为30枚时,花药愈伤组织诱导率较高于其它接种密度;pH值5.3左右较合适;培养容器以三角瓶(50ml)和试管(15×100mm)对愈伤组织的诱导较好,培养基中添加活性碳在0~0.4g/L的范围内对花药愈伤组织形成有促进作用,当超过此浓度后,反而抑制了愈伤组织的形成.瓜尔豆花药愈伤组织分化研究中发现BA效果优于KT.但是BA诱导出的绿色芽点却无法继续培养.有关这方面的研究尚须进一步深入.
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