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microRNA(miRNA)是生物体内一类内源性非编码小单链RNA，长度为18～25nt。广泛存在于植物、动物、细菌、病毒等多种生物物种中，最新的miRbase18.0报道了21643种成熟miRNA序列以及18226种miRNA前体序列，涉及到168个物种，其中大多数miRNA在进化上具高度保守性。miRNA通过转录后水平调控基因的表达，几乎参与调控动植物的各个生物进程中，包括生长、发育、细胞分化、增殖、代谢、凋亡、疾病发生等，在机体基因表达调控中起到重要的作用。 凡纳滨对虾(Litopenaeus Vannamei)，世界对虾养殖的三大品种之一，是一种高蛋白低脂肪的优质虾种，具有较高的经济价值和营养价值。然而在本研究之前，有关凡纳滨对虾miRNA的研究尚未报道，本研究首次通过Solexa测序、miRNA芯片、克隆测序、荧光定量PCR和Northern blot的方法，挖掘凡纳滨对虾中miRNA；并研究了饲料中添加复合多糖对对虾miRNAs表达的影响，运用RNAhybrid程序预测与对虾免疫相关miRNA的功能。 具体实验结果如下： 1、采用Solexa测序，挖掘了凡纳滨对虾中存在355种保守miRNA，以及32种凡纳滨对虾特异性miRNA。miRNA芯片分析凡纳滨对虾中保守miRNA，发现67种，其中miR-1175等13种miRNA与Solexa测序结果一致。Northern blot杂交检测到凡纳滨对虾特异性new2，new16以及保守miR-1。cDNA克隆出miR-1等11种miRNA序列，其中miR-1、let-7、m1R-276a、miR-276、miR-276-5p、miR-71、miR-305、miR-100和miR-281-2*均具有很好的物种间保守性，而miR-279、miR-995、miR-1621*和miR-998虽然不完全保守，但不匹配碱基是不超过2个，保守性还是很高。 2、在凡纳滨对虾鳃、肝胰腺、肌肉三种组织中，实时荧光定量PCR检测9种miRNA表达量，包括let-7、miR-279、miR-276、miR-276a、miR-998、miR-995、miR-305、miR-71和miR-100。以let-7为内参，结果显示m1R-279、miR-276和miR-276a在鳃中表达量极显著高于其他两种组织(P<0.01)；miR-998在鳃和肝胰腺中表达极显著高于肌肉组织(P<0.01)；miR-995在鳃中表达最高，肝胰腺其次，肌肉最低，在三种组织之间均有极显著差异(P<0.01)；miR-305的表达在鳃和肝胰腺中显著高于肌肉中(P<0.05)；其他miRNA如miR-71、miR-100在三种组织中之间表达差异不显著。同时，三种组织中，miR-305和miR-100在表达均较高，而miR-279表达量均较低。 3、以凡纳滨对虾为研究对象，在饲料中添加100mg kg-l复合多糖，实验62d后，运用miRNA芯片检测对虾全组织中差异表达的miRNA，以及实时荧光定量PCR检测2中所述9种miRNA在肝胰腺、鳃和肌肉三种组织的表达差异。miRNA芯片分析结果显示67种miRNA表达有差异显著(Fold-change>1.5)，其中miR-453等18种miRNA表达下调，而miR1440等49种miRNA表达量上调。实时荧光定量分析miRNA在三种组织中的表达差异显示，复合多糖处理后miR-995在肝胰腺表达显著下调(P<0.01)。最后运用RNAhybrid预测复合多糖处理后差异表达miRNA靶基因，结果显示miR-453、miR398a和miR1130可能的靶基因是sod，同时miR399和miR399f可能的靶基因是cat，miR167a、miR167h、m1R398a和miR-456可能的靶基因是prx。miR-995可能的靶基因C型凝集素和免疫Ig血蓝蛋白等。这些提示在饲料中添加复合多糖后，miRNA可能参与调控免疫相关基因sod、cat、prx或免疫调控蛋白C型凝集素和免疫Ig血蓝蛋白，从而提高凡纳滨对虾免疫力。