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【目的】本研究以结肠炎癌转化过程中的结肠干细胞巢细胞极性丧失为切入点。选择以AOM/DSS诱导的小鼠结肠炎癌转化模型为研究对象,在明确吴茱萸黄连配伍阻止延缓小鼠结肠炎癌转化以及对结肠畸变隐窝灶影响的基础上,观察其不同配伍比.例对小鼠结.肠组织.中炎症相.关因.子IL-6、TNF-α的表.达情况,以及.对Wnt-1/β-catenin信号通.路的影响,从调.控.结.肠干细胞巢细胞极性减少畸变隐窝灶数量的角度探讨吴茱萸黄连配伍阻止延缓结肠炎癌转化的作用机制。【方法】1.AOM/DSS结肠炎癌转化小鼠模型的建立:C57BL/6小鼠第1天按照10mg/kg的剂量腹腔注射AOM,7天后2.5%DSS溶液连续饮用7天,继以无菌饮用水连续喂养14天为一周期,重复3个周期。分别于第1、2、3周期末取小鼠结肠组织,同时每天监测小鼠的一般状态、饮食、体重、大便等,取材后观察结肠组织大体形态,通过H&E染色观察结肠组织病理情况以及畸变隐窝灶的数量。通过对1、2、3周期小鼠的病理染色情况以及畸变隐窝灶数量确定模型建立情况。2.萸连配伍对AOM/DSS诱导的小鼠结肠炎癌转化模型及ACF的干预效应:将小鼠随机分为空白组、模型组、萸连1:1组、萸连1:6组、萸连6:1组,每组24只。除空白组外其余各组的小鼠AOM/DSS诱导造模,各组于注射AOM后7天开始给予对应药物干预,连续给药3个周期。分别于每个周期末取材,监测小鼠的一般情况、饮食、体重变化、疾病活动指数(DAI)评分、成瘤数量等,通过观察各个周期结肠组织病理染色情况以及ACF数量等,评价萸连配伍的疗效,并筛选出萸连配伍的最佳配伍比例。3.萸连配伍阻止延缓AOM/DSS诱导的小鼠结肠炎癌转化的作用机制:剪取小鼠的部分结肠组织,采用ELISA检测组织中的炎症相关因子IL-6、TNF-α的表达情况,采用实时定量.荧光PCR检测结.肠组织中Wnt-1、β-catenin m RNA的表达情况,Western-blot检测.结肠.组织中Wnt-1、β-catenin蛋白的表达。【结果】1.AOM/DSS诱导构建结肠炎癌转化小鼠模型:在注射AOM一周后饮用DSS时,小鼠开始出现体重下降,精神萎靡,背毛失泽,活动迟缓,肛周血迹,DAI评分增高等。H&E病理组织染色示:模型组在第1周期结束时组织标本:结肠单层.柱状.上皮、固有.层可见.广泛.炎症细.胞浸润,炎症形成。第2周期结束时组织.标本:结肠隐.窝腺.体形.状变形、排列错.乱、分裂,部.分形成.畸变.隐窝灶,部分小鼠结肠出现多形性的中度不典型增生。第3周期末组织标本:不典型增生非常明显,部分增生严重区域扩展到粘膜肌层,大部分结肠可见腺体结构扭曲变形,细胞核增大深染,核质比例较前明显增大,结肠肿瘤形成。2.萸连1:1配伍确能阻止延缓AOM/DSS诱导的小鼠结肠炎癌转化模型,并能减少ACF的形成:萸连1:1组小鼠一般情况、精神状态、活动度等较其余各造模组好,体重增长百分比较模型组显著增加(p<0.01),成瘤率较其余组低。除空白组外,其余各组DAI评分在DSS喂养的一段时间内均明显增加,其中萸连1:1组DAI评分增加幅度较其余各组小,萸连6:1、1:6组同模型组未见明显差异。H&E病理组织染色示:萸连1:1组在第1、2、3周期末结肠组织隐窝结肠破坏情况、增生情况均较其余各造模组轻微,萸连1:6、6:1组次之。萸连1:1组在第2周期末对ACF形成的影响较模型组明显减少,差异显著(p<0.01),萸连6:1、1:6组未见明显差异。3.萸连1:1配伍对AOM/DSS诱导的结肠炎癌转化模型小鼠结肠组织中IL-6、TNF-α、Wnt-1/β-catenin的影响:小鼠结肠组织中IL-6、TNF-α含.量:与空白.组比较,模型.组小鼠.血清IL-6、TNF-α升.高,差异有统计学意义(p<0.01);与模型组比较,萸连1:1组IL-6、TNF-α含量降低,差异有统计学意义(p<0.05)。表明萸连1:1配伍能够下调小鼠结肠组织中IL-6、TNF-α。小鼠结肠组织中Wnt-1、β-catenin m RNA和蛋白的表达情况:与空白组小鼠比较,模型组、萸连1:1组小鼠结肠组织Wnt-1、β-catenin m RNA的表达均显著升高(p<0.01)。与模型组小鼠比较,萸连1:1组小鼠结肠组织Wnt-1 m RNA和蛋白的表达均减少(p<0.05);β-catenin m RNA和蛋白的差异无统计学意义(p>0.05)。【结论】萸连1:1组较萸连1:6、6:1组在减少ACF的形成,阻止延缓AOM/DSS诱导小鼠结肠炎向结肠癌转化的过程中具有更好的阻延效应。其减少ACF的数量与降低.模型小鼠结.肠组织中.的炎.症相关.因子IL-6、TNF-α,抑制Wnt-1/β-catenin信号通路有关。