背景和目的：　　核因子κB（NF-κB）是一种核转录因子，可以调节大量与细胞凋亡的调控，病毒复制，肿瘤，炎症，各种自身免疫性疾病相关基因的关键表达。通常，NF-κB与其抑制剂IκB蛋白结合存在于细胞质中。BMS-345541（BMS）是一种特异的IκB激酶β（IKKβ）抑制剂,在2003年被首次报道。近十几年，BMS-345541作为IKKβ特异性抑制剂，产生的免疫，炎症以及肿瘤方面的生物学效应有了大量研究。MCF-7乳腺癌细胞为Caspase3缺失细胞，所以对诱导细胞凋亡的各种细胞刺激因子均不敏感。而我们前期的结果表明，BMS在体内和体外均能够增加多种肿瘤细胞的辐射敏感性，其中包括MCF-7乳腺癌细胞。但是，BMS增强肿瘤细胞的辐射敏感性的机制尚不明了。在前期的试验中，我们采用微阵列分析方法，分析BMS处理MCF-7细胞后，基因表达的改变情况，其中有146个基因显著性表达升高，723个基因表达降低，在表达升高的所有基因中，类E1A的分化抑制因子3（EID3）为升高倍数最高的一个基因。EID3是EID家族的一个新成员，该家族由三个成员组成，分别是EID1，EID2和EID3。EID家族的成员都可以与CREB结合蛋白(CBP)和p300相互作用，通过抑制p300的组蛋白乙酰转移酶的活性抑制基因的转录和细胞的分化。EID3还通过与Nse3相互反应，参与染色体5-6大型结构维持蛋白复合体的组成，此复合体调节染色质的组织和动态并参与细胞的DNA损伤反应。但是，EID3是否参与肿瘤细胞对放疗和化疗的反应却并不明确，因此，在本课题中，我们研究EID3是否介导BMS对MCF-7细胞的放疗和化疗增敏效应。在前期工作基础上，本论文通过建立依赖强力霉素表达EID3的稳定转染细胞株EID3-MCF-7，观察EID3在调节肿瘤细胞辐射敏感性中的作用。　　材料与方法:　　1.BMS对MCF-7中EID3表达的影响:　　(1)用5μMBMS处理MCF-7细胞，分别在不同时间点收集并提取各组样品的总RNA和蛋白；　　(2)用不同浓度的BMS处理MCF-7细胞，8小时后收集并提取各组样品的总RNA和蛋白；　　(3)用RT-PCR的方法，将收集的各组RNA逆转录成cDNA，并用qRT-PCR的方法检测各组EID3以及EID1，EID2的表达情况；　　(4)用Western blot的方法检测各组中EID3蛋白表达的情况。　　2.EID3基因沉默对BMS诱导的MCF-7细胞辐射增敏的影响：　　(1)构建EID3基因沉默的稳定转染细胞株MCF-7-shRNA以及对应的空质粒转染的细胞株MCF-7-vector；　　(2)用BMS预处理两种稳定转染细胞株8小时，再以2Gy的剂量辐射细胞；　　(3)用集落形成实验检测EID3基因在BMS诱导MCF-7细胞辐射增敏中的作用。　　3.诱导性高表达EID3基因对MCF-7细胞的影响：　　(1)利用Tet-on高级的诱导表达系统，构建由Dox诱导EID3高表达的稳定转染细胞株；　　(2)通过细胞生长曲线的检测，克隆形成实验和流式细胞术，检测高表达EID3对MCF-7细胞生长及凋亡的影响；　　(3)用克隆形成实验，检测高表达EID3对不同辐射剂量的处理或者化疗常用药物VP16处理的MCF-7细胞生存分数的影响；　　4.高表达EID3基因对辐射处理的MCF-7细胞的衰老以及DNA损伤的影响：　　(1)用SA-β-gal染色的方法以及流式细胞术为基础的C12FDG染色方法，检测EID3高表达对辐射处理的MCF-7细胞的衰老促进作用；　　(2)用细胞免疫荧光的方法，检测EID3高表达对辐射处理的MCF-7细胞的DNA损伤修复的影响；　　(3)用Western blot的方法，检测EID3高表达对辐射处理的MCF-7细胞的磷酸化p53蛋白表达的影响。　　5.诱导性高表达EID3基因对辐射处理的MCF-7细胞衰老的促进作用的机制探讨：　　(1)用qRT-PCR的方法，检测高表达EID3对辐射处理的MCF-7细胞的p16，p21，p57基因表达的影响；　　(2)用western blot的方法检测高表达EID3对辐射处理的MCF-7细胞的p21和p57蛋白表达的影响。　　结果：　　1.BMS可特异诱导EID3在MCF-7细胞中的高表达，且具有时间依赖性和剂量依赖性；其中，BMS5μM处理MCF-7细胞8小时，诱导EID3表达效果最好。　　2.辐射条件下，EID3基因沉默可减弱 BMS对MCF-7细胞的克隆形成的抑制作用；　　3.诱导性高表达EID3基因，对正常的 MCF-7细胞生长和凋亡没有影响；但可增加MCF-7细胞的辐射敏感性以及对化疗药物的敏感性；　　4.诱导性高表达EID3基因，可增加由辐射引起的MCF-7细胞的衰老，但对辐射引起的MCF-7细胞的DNA损伤及修复没有影响；　　5.诱导性高表达EID3基因，可增加辐射的MCF-7细胞的p21和p57基因及蛋白的表达。　　结论：　　1.BMS诱导MCF-7细胞辐射增敏的作用与其诱导EID3表达有关；　　2.诱导性高表达EID3基因，对正常的MCF-7细胞生长没有影响，但在辐射条件下，可增加MCF-7细胞对辐射的敏感性；　　3.诱导性高表达EID3基因，通过上调 p21和p57的表达，增加辐射引起的MCF-7细胞的衰老，从而增加了MCF-7细胞的辐射敏感性。