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目的构建弓形虫pET28a-SAG1和pET28a-SAG4重组基因并原核细胞表达弓形虫pET28a-SAG1和pET28a-SAG4重组蛋白；并以此免疫动物来评价pET28a-SAG1和pET28a-SAG4重组蛋白的免疫效果。为弓形虫病的基因疫苗应用提供科学依据。方法根据GenBank发表的RH株弓形虫SAG1和SAG4序列设计合成2对特异性引物,提取弓形虫基因组DNA,以其为模板,PCR扩增这2个抗原基因,并构建到pMD19(Simple)克隆载体上,经菌落PCR、双酶切鉴定并测序正确后,再将酶切产物纯化好的SAG1和SAG4基因构建到pET28a原核表达系统中,并在BL21大肠埃希菌中表达；鉴定并纯化重组蛋白,免疫小鼠,取血清,应用间接ELISA法检测小鼠血清中抗弓形虫抗体IgG,并通过攻虫试验来观察小鼠的发病及死亡情况以评价这2个重组蛋白的免疫保护作用。结果成功获取SAG1与SAG4基因,并且将这2个基因构建到了pMD19 (Simple)载体和原核表达质粒pET28 a载体上,成功获得pET28a-SAG4和pET28a-SAG1。原核表达后分别获取到SAG4和SAG1目的重组蛋白。应用纯化的重组蛋白免疫小鼠后各组小鼠血清OD值差异有统计学意义(p<0.01),双蛋白免疫组的血清OD值升的最高；攻击实验时,双蛋白免疫组存活时间最长,pET28a-SAG1组存活时间比p ET28a-SAG4组长,差异有统计学意义(p<0.01)。结论1.成功构建pET28a-SAG1和pET28a-SAG4重组基因并表达和纯化出目的重组蛋白。2.国内首次用昆明小鼠做弓形虫的攻虫实验,证明昆明小鼠对弓形虫易感。3.攻虫实验表明双蛋白免疫组小鼠存活时间长于单蛋白免疫的存活时间,pET28a-SAG1组小鼠存活时间长于pET28a-SAG4组。pET28a-SAG1蛋白的免疫保护作用比pET28a-SAG4蛋白好。4.这两个基因所表达的蛋白质皆有免疫保护作用。