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目的:本文旨在研究妊娠期运动对自发性高血压大鼠(Spontaneouslyhypertensiverat,SHR)雄性子代血管功能的短期和长期影响,并通过CaV1.2通道功能及其α1C亚基的DNA甲基化研究,探讨妊娠期运动对高血压雄性子代血管功能的“印迹”效应,进而为妊娠期运动对原发性高血压的早期干预提供实验依据,同时为妊娠期高血压患者及其子代的机体健康的改善提供一定的指导思路。
方法:分别选择雌性(11周龄)和雄性(12周龄)SHR大鼠,雌性(11周龄)和雄性(12周龄)Wistar-Kyoto(WKY,SHR的正常血压对照组)大鼠用于配种。孕鼠随机分为四组,WKY安静组(WKY-SED)、WKY运动组(WKY-EX)、SHR安静组(SHR-SED)和SHR运动组(SHR-EX)。运动方案为无负重游泳训练,1h/d,6d/w。分别检测孕鼠和子代的体重,孕鼠的流产率,胎鼠的体长以及胎盘重量。采用尾动脉无创血压测量和股动静脉插管手术后在体股动脉测量两种方法监测3月龄和6月龄雄性子代心率和血压;股动静脉插管手术后在体静脉注射NE(18μg/kg)、CaV1.2通道开放剂BayK8644(0.1mg/kg)和阻断剂Nifedipine(1mg/kg)检测心血管反应性以及CaV1.2通道在其中的调控作用;微血管张力实验加入NE(10-5M)和Nifedipine(10-9-10-5M)检测肠系膜动脉血管反应性以及CaV1.2通道在其中的调控作用;膜片钳电生理实验检测CaV1.2通道全细胞电流;westernblot检测CaV1.2通道α1C亚基、DNMT1、DNMT3A和DNMT3B蛋白表达;荧光定量PCR检测CaV1.2通道α1C亚基mRNA表达;DNA亚硫酸氢盐PCR测序检测CaV1.2通道α1C亚基基因CACNA1C启动子区的DNA甲基化水平。
结果:(1)妊娠期运动显著抑制高血压孕鼠妊娠末期的体重增长幅度的下降(P<0.05),并且显著抑制高血压引起的流产率增加。(2)妊娠期运动显著降低高血压3月龄雄性子代的舒张压和平均动脉压(P<0.05),随年龄增长,这种改善作用逐渐消退,到6月龄雄性子代与SHR-SED组相比无显著差异。(3)妊娠期运动可显著降低高血压雄性子代对NE的血压反应(P<0.05),这种改善作用可持续到雄性子代6月龄。(4)妊娠期运动可降低高血压雄性子代肠系膜动脉对NE的敏感性(3月龄:P<0.05;6月龄:P<0.01),并且一直保持到6月龄雄性子代。(5)妊娠期运动显著降低高血压3月龄和6月龄雄性子代对CaV1.2通道开放剂BayK8644的升压反应和阻断剂Nifedipine的降压反应(P<0.05),随年龄增长,这种改善作用并未出现显著的变化。(6)妊娠期运动显著抑制高血压雄性子代肠系膜动脉对Nifedipine的舒张反应(3月龄:P<0.01;6月龄:P<0.05),但在6月龄雄性子代其舒张反应出现显著上调(P<0.05)。(7)在膜片钳电生理实验中发现,妊娠期运动显著降低高血压雄性子代CaV1.2通道的全细胞电流(P<0.05),随年龄增加,CaV1.2通道的全细胞电流有显著的回升趋势(P<0.05)。(8)CaV1.2通道α1C亚基蛋白和mRNA表达在高血压妊娠期运动组雄性胎鼠20.5天、3月龄和6月龄子代均显著下调(P<0.05)。(9)DNA甲基化检测显示,妊娠期运动显著上调高血压雄性子代胎鼠20.5天、3月龄和6月龄CaV1.2通道α1C亚基基因CACNA1C的DNA甲基化水平(P<0.05)。(10)妊娠期运动可显著上调高血压雄性子代DNMT1(P<0.01)、DNMT3A(P<0.01)和DNMT3B(P<0.05)蛋白表达。
结论:(1)妊娠期运动显著降低高血压雄性子代血压,随年龄增长,这种改善作用在逐渐消退。(2)妊娠期运动显著改善高血压雄性子代的心血管反应性。(3)妊娠期运动可通过CaV1.2通道α1C亚基蛋白和mRNA表达减少,下调其在血管张力中的功能,进而导致血压下降,其中,CaV1.2通道α1C亚基基因CACNA1C启动子区的甲基化水平增加可能在其中发挥了重要的作用。
方法:分别选择雌性(11周龄)和雄性(12周龄)SHR大鼠,雌性(11周龄)和雄性(12周龄)Wistar-Kyoto(WKY,SHR的正常血压对照组)大鼠用于配种。孕鼠随机分为四组,WKY安静组(WKY-SED)、WKY运动组(WKY-EX)、SHR安静组(SHR-SED)和SHR运动组(SHR-EX)。运动方案为无负重游泳训练,1h/d,6d/w。分别检测孕鼠和子代的体重,孕鼠的流产率,胎鼠的体长以及胎盘重量。采用尾动脉无创血压测量和股动静脉插管手术后在体股动脉测量两种方法监测3月龄和6月龄雄性子代心率和血压;股动静脉插管手术后在体静脉注射NE(18μg/kg)、CaV1.2通道开放剂BayK8644(0.1mg/kg)和阻断剂Nifedipine(1mg/kg)检测心血管反应性以及CaV1.2通道在其中的调控作用;微血管张力实验加入NE(10-5M)和Nifedipine(10-9-10-5M)检测肠系膜动脉血管反应性以及CaV1.2通道在其中的调控作用;膜片钳电生理实验检测CaV1.2通道全细胞电流;westernblot检测CaV1.2通道α1C亚基、DNMT1、DNMT3A和DNMT3B蛋白表达;荧光定量PCR检测CaV1.2通道α1C亚基mRNA表达;DNA亚硫酸氢盐PCR测序检测CaV1.2通道α1C亚基基因CACNA1C启动子区的DNA甲基化水平。
结果:(1)妊娠期运动显著抑制高血压孕鼠妊娠末期的体重增长幅度的下降(P<0.05),并且显著抑制高血压引起的流产率增加。(2)妊娠期运动显著降低高血压3月龄雄性子代的舒张压和平均动脉压(P<0.05),随年龄增长,这种改善作用逐渐消退,到6月龄雄性子代与SHR-SED组相比无显著差异。(3)妊娠期运动可显著降低高血压雄性子代对NE的血压反应(P<0.05),这种改善作用可持续到雄性子代6月龄。(4)妊娠期运动可降低高血压雄性子代肠系膜动脉对NE的敏感性(3月龄:P<0.05;6月龄:P<0.01),并且一直保持到6月龄雄性子代。(5)妊娠期运动显著降低高血压3月龄和6月龄雄性子代对CaV1.2通道开放剂BayK8644的升压反应和阻断剂Nifedipine的降压反应(P<0.05),随年龄增长,这种改善作用并未出现显著的变化。(6)妊娠期运动显著抑制高血压雄性子代肠系膜动脉对Nifedipine的舒张反应(3月龄:P<0.01;6月龄:P<0.05),但在6月龄雄性子代其舒张反应出现显著上调(P<0.05)。(7)在膜片钳电生理实验中发现,妊娠期运动显著降低高血压雄性子代CaV1.2通道的全细胞电流(P<0.05),随年龄增加,CaV1.2通道的全细胞电流有显著的回升趋势(P<0.05)。(8)CaV1.2通道α1C亚基蛋白和mRNA表达在高血压妊娠期运动组雄性胎鼠20.5天、3月龄和6月龄子代均显著下调(P<0.05)。(9)DNA甲基化检测显示,妊娠期运动显著上调高血压雄性子代胎鼠20.5天、3月龄和6月龄CaV1.2通道α1C亚基基因CACNA1C的DNA甲基化水平(P<0.05)。(10)妊娠期运动可显著上调高血压雄性子代DNMT1(P<0.01)、DNMT3A(P<0.01)和DNMT3B(P<0.05)蛋白表达。
结论:(1)妊娠期运动显著降低高血压雄性子代血压,随年龄增长,这种改善作用在逐渐消退。(2)妊娠期运动显著改善高血压雄性子代的心血管反应性。(3)妊娠期运动可通过CaV1.2通道α1C亚基蛋白和mRNA表达减少,下调其在血管张力中的功能,进而导致血压下降,其中,CaV1.2通道α1C亚基基因CACNA1C启动子区的甲基化水平增加可能在其中发挥了重要的作用。