目的:　　1.构建耐药肝癌细胞模型。　　2.检测Flot下调对ERK1/2信号通路的影响，明确能否通过Flot调控ERK1/2信号通路从而实现肝癌细胞耐药性的逆转。　　3.检测脂筏破坏剂甲基-β-环糊精破坏脂筏结构对ERK1/2的影响，探索脂筏与ERK1/2之间的关联。　　4.检测下调Flot对耐药肝癌细胞侵袭能力的影响。　　5.构建过表达质粒Flot1/pcDNA3.1(+)、Flot2/pcDNA3.1(+)，为后续研究工作奠定基础。　　方法:　　1.用阿霉素大剂量冲击法诱导细胞，Celltiter-Glo荧光细胞活性检测法检测细胞对阿霉素的敏感性。　　2.设计siRNA和shRNA，Real-Time-PCR和Western Blotting筛选出对Flot的下调效果更佳的方法。后续实验采用该方法下调Flot; Western Blotting方法检测各组细胞中C-RAF、MEK1/2、ERK1/2的表达水平。　　3.用脂筏破坏剂甲基-β-环糊精破坏脂筏结构，激光共聚焦显微镜验证其作用效果，Western Blotting方法检测脂筏破坏后细胞内ERK1/2的表达水平。　　4.体外划痕实验检测Flot下调后细胞越过划痕区距离的变化。　　5.PCR扩增Flot序列，将其插入pcDNA3.1(+)真核表达载体，构建重组质粒Flot1/pcDNA3.1(+)、Flot2/pcDNA3.1(+)。　　结果:　　1.阿霉素诱导得到的两株肝癌细胞株SMMC-7721/ADM和BEL-7402/ADM耐药指数分别为16.44和20.34，符合高度耐药。　　2.与shRNA方法比较，siRNA方法沉默效率更高，故后续实验选用siRNA干扰的方法下调Flot。与对照组相比，实验组细胞磷酸化C-RAF，磷酸化MEK1/2表达水平水平明显降低，且siRNA转染时间越长，下调效果越明显;非磷酸化C-RAF，MEK1/2表达水平未受明显影响。磷酸化ERK1/2表达水平先短暂升高后逐渐降低，最后明显低于对照组水平;非磷酸化ERK1/2表达未受明显影响。　　3.与对照组相比，经甲基-β-环糊精作用后的实验组细胞在共聚焦显微镜下观察到的绿色荧光明显减少，且其磷酸化ERK1/2显著降低。　　4.siRNA转染后的细胞组比对照组细胞越过划痕区距离明显缩短。　　5.重组质粒Flot1/pcDNA3.1(+)、Flot2/pcDNA3.1(+)转入细胞后Flot-1、Flot-2表达水平明显升高。　　结论:　　1.成功构建耐药肝癌细胞模型SMMC-7721/ADM和BEL-7402/ADM。　　2.下调Flot后ERK1/2信号通路被抑制，这为通过Flot调控ERK1/2信号通路从而实现耐药性的逆转提供理论依据。　　3.脂筏参与调控ERK1/2的激活。　　4.Flot的表达水平影响肝癌细胞侵袭能力。　　5.成功构建过表达质粒Flot1/pcDNA3.1(+)、Flot2/pcDNA3.1(+)，为后续实验奠定了基础。