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目的:研究小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)对实验性干燥综合征小鼠(experimental Sj?gren syndrome,ESS)疾病进程的影响;探究BM-MSCs对髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)的调控作用及其分子机制。方法:(1)构建ESS小鼠模型,于初次免疫后的第18天和第25天经尾静脉过继转移BM-MSCs至ESS小鼠,检测小鼠唾液流速,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中抗SG抗体,抗核抗体和抗M3R抗体的水平。流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测小鼠脾脏及颈部淋巴结中Th1和Th17细胞的比例。(2)尾静脉过继转移BM-MSCs于ESS小鼠,FCM检测小鼠脾脏及颈部淋巴结中总MDSCs及其亚群多核细胞样MDSCs(polymorphonuclear MDSCs,PMN-MDSCs)和单核细胞样MDSCs(monocytic MDSCs,M-MDSCs)的比例。采用免疫磁珠法分选不同处理组ESS小鼠脾脏中的CD11b~+Gr-1~+MDSCs,FCM检测MDSCs对CFSE标记的CD4~+T细胞增殖的影响,比色法检测MDSCs相关免疫抑制效应分子精氨酸酶1(arginase-1,Arg-1)的活性,Griess偶联法检测一氧化氮(nitric oxide,NO)的含量。(3)采用免疫磁珠法分选ESS小鼠脾脏来源的MDSCs,与BM-MSCs共培养,FCM检测MDSCs对CFSE标记的CD4~+T细胞增殖的影响,比色法检测MDSCs相关免疫抑制效应分子Arg-1的活性,Griess偶联法检测NO的含量。FCM检测MDSCs表面分子CD40,CD80,CD86和MHCII的表达量。(4)为了进一步探究BM-MSCs调控MDSCs的分子机制,实时荧光定量PCR(real time fluorescene quantitative PCR,qRT-PCR)和FCM检测BM-MSCs中的细胞因子,并筛选出BM-MSCs中的细胞因子(TGF-β1)。采用TGF-β1中和抗体中和TGF-β1,检测处理后的BM-MSCs对MDSCs免疫抑制功能调控的影响,包括对CD4~+T细胞增殖的影响,Arg-1的活性和NO的含量的变化。结果:(1)与对照组相比,BM-MSCs处理组小鼠唾液流速明显加快(p<0.01);小鼠血清中抗SG抗体,抗核抗体和抗M3R抗体的水平显著降低(p<0.01);BM-MSCs处理组小鼠脾脏中Th1细胞的比例为4.15±0.65%,Th17细胞的比例为4.83±0.30%,对照组小鼠脾脏中Th1细胞的比例为9.03±0.83%,Th17细胞的比例为8.25±0.35%;BM-MSCs处理组小鼠颈部淋巴结中Th1细胞的比例为0.99±0.05%,Th17细胞的比例为1.01±0.18%,对照组小鼠颈部淋巴结中Th1细胞的比例为3.50±0.32%,Th17细胞的比例为2.01±0.29%。表明BM-MSCs处理组小鼠脾脏及颈部淋巴结中Th1(p<0.01)和Th17(p<0.05)细胞的比例明显降低。(2)BM-MSCs过继转移至ESS小鼠后,小鼠脾脏中MDSCs比例为2.77±0.28%,颈部淋巴结中MDSCs比例为1.23±0.11%,对照组小鼠脾脏中MDSCs比例为1.31±0.27%,颈部淋巴结中MDSCs比例为0.45±0.04%。BM-MSCs处理组小鼠脾脏及颈部淋巴结中MDSCs比例明显升高(p<0.01),此外,MDSCs的两个细胞亚群PMN-MDSCs、M-MDSCs比例也明显升高(p<0.01)。BM-MSCs处理后的MDSCs对CD4~+T细胞增殖的抑制作用增强,且MDSCs相关效应分子Arg-1的活性显著增高(p<0.01),NO的含量显著升高(p<0.01);此外,BM-MSCs对ESS小鼠体内MDSCs两个细胞亚群的免疫抑制功能均有调控作用。(3)体外实验中,BM-MSCs处理后的MDSCs对CD4~+T细胞增殖的抑制作用增强,MDSCs相关效应分子Arg-1的活性显著增高(p<0.01),NO的含量明显升高(p<0.01);BM-MSCs处理后的MDSCs表面分子CD40,CD80,CD86,MHCII表达量均低于对照组。(4)与MDSCs共培养状态下,BM-MSCs中TGF-β1表达量显著升高,中和TGF-β1后,其对MDSCs免疫抑制功能的调控作用明显减弱,包括MDSCs对CD4~+T细胞增殖的抑制作用明显下降,Arg-1的活性降低(p<0.05),NO的含量减低(p<0.05)。结论:(1)体内和体外实验结果表明,BM-MSCs可通过增强ESS小鼠脾脏中MDSCs及其亚群的免疫抑制功能,有效减轻ESS小鼠疾病的严重程度;(2)BM-MSCs主要通过分泌TGF-β1增强MDSCs的免疫抑制功能。