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副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种革兰氏阴性嗜盐细菌,广泛存在于近岸海水等水域环境。摄入被该菌污染的水产品可导致人肠胃炎、腹泻疾病,甚至死亡。检测该菌在水产品中的污染情况对于保障食品安全至关重要。本研究于2017年7-8月从上海市嘉定区嘉燕水产市场、上海市宝山区江杨农产品批发市场采集了25种水产品样品,包括4种鱼类,2种虾类和19种贝类。从其中分离、鉴定了561株副溶血性弧菌,并对其毒力、抗菌素和重金属耐受性以及遗传多样性进行了分析。研究结果显示:受试菌株均不含有编码耐热直接溶血素(thermostable direct hemolysin,TDH)基因tdh;1株含有TDH相关溶血素(thermostable related hemolysin,TRH)基因trh(0.2%)。受试的561株副溶血性弧菌对六大类十种抗菌素的耐药性存在显著差异,其中氨苄青霉素的耐药率最高(93%),其次为利福平(82.9%)和链霉素(75.4%);四环素、卡那霉素和庆大霉素的中介耐药率分别为73.4%、48.1%和35.7%;氯霉素和复方新诺明的敏感率分别为99.5%、95%;77.5%的受试菌株检测为多重耐药(multidrug resistant,MDR)表型。另外,74.7%和56.2%的受试菌株分别对重金属汞(Hg2+)和锌(Zn2+)具有高度耐受性。研究结果还显示,分离自不同类的水产品,或同类不同种水产品中的副溶血性弧菌的抗性谱存在显著差异。基于获得的ERIC-PCR(entero-bacterial repetitive intergenic consersisi-PCR)DNA指纹图谱,561株副溶血性弧菌分为552个基因型,聚类为11个簇。其中435株MDR菌株分为428个基因型,聚类为12个簇。上述结果表明,25种水产品样品中的副溶血性弧菌具有丰富的遗传多样性。其中,中国仙女贝(Callista chinensis),黄蚬(Corbicula aurea),弓獭蛤(Lutraria arcuata)中副溶血性弧菌的污染情况为本文首次研究报道。其次,本研究还基于环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,针对副溶血性弧菌主要毒素编码基因(tdh,trh),分别设计了6条特异性引物[内引物(inner primers)、外引物(outer primers)和环引物(loop primers)],以毛细管为反应介质,首次建立了微量(5 L)、特异、灵敏、低成本、可视化的毛细管LAMP(capillary LAMP,cLAMP)检测方法。优化后的微量(5 L)cLAMP反应体系包括:6 mmol/L或8 mmol/L Mg2+,1.44 mmol/L或1.28 mmol/L dNTPs,0.48 U Bst DNA聚合酶,内外引物比为8:1;反应温度为65℃,反应时间为60 min。针对靶基因tdh和trh,cLAMP方法检测副溶血性弧菌基因组DNA的最低检测限分别为3 fg/μL和34 fg/μL;纯培养物的最低检测限分别为9.85×103 CFU/mL和8.25×105CFU/mL;与其他6种常见致病菌霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、创伤弧菌(Vibrio vulnificus)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)均无交叉反应。综上所述,本文研究结果不仅为我国水产食品安全风险评估提供了有用的数据,而且为副溶血性弧菌的快速、微量、可视化检测试剂盒的研发提供了技术支撑。