转Bt基因抗虫棉杀虫蛋白表达量的免疫学测定及时空变化研究

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从苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt菌)HD-1中提取Bt杀虫蛋白,作为抗原免疫家兔,得到高效价的抗血清.利用抗体-抗原-酶标抗体反应,建立了酶联免疫学测定方法(ELISA法),可定量检测转Bt杀虫蛋白基因植物组织内Bt蛋白的含量.用建立的ELISA方法检测了转Bt杀虫蛋白基因烟草(Bt烟草)的叶片、花器、铃和蕾等部位,并同生物测试法相比较,发现两种方法有很好的相关性.同生物测试法相比,ELISA法具有检测周期短,操作简便的优点,并且可以精确定量.研究还发现,在种子萌发的初期,杀虫蛋白就开始表达,并随着时间的推移,表达量逐渐提高.而在未萌发的种子中,杀虫蛋白含量很低.对棉叶提取液进行超滤处理,ELISA的检测结果显示,在胞浆中杀虫蛋白含量很低,而在膜系统处理液中含量较高,初步推测杀虫蛋白可能结合于膜系统上.
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