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研究背景： 自1993年在线虫中发现了第一个microRNA（miRNA）—Lin-4以来，miRNA逐渐受到科学家们的关注。它们是一类内源性的具有调控功能的非编码 RNA（ncRNA），通过碱基互补配对的方式识别靶mRNA，并根据互补程度的不同在转录后水平对靶基因的翻译进行抑制或降解靶mRNA。大量的研究表明miRNA参与各种各样的调节途径，包括发育、病毒防御、造血过程、器官形成、细胞增殖和凋亡、脂肪代谢等等。随着对miRNA的研究的深入，众多的研究发现miRNA在肿瘤的形成中发挥着类似癌基因或抑癌基因的作用。目前许多国内外的学者对miRNA在多种肿瘤中的表达及其与肿瘤发生、发展、治疗及预后的关系进行了相关的研究工作。但关于miRNA在胃癌中表达情况的研究尚需加强。 有研究者利用基因芯片技术检测出miR-191在多种肿瘤中呈异常表达，其中在胃癌呈高表达，但利用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR，qRT-PCR）等检测方法对其结果的验证尚缺乏，与胃癌的临床病理特征的关系所知尚少，而且，miR-191在胃癌中是通过哪个靶基因发挥作用更是尚未有相关报道。 目的： 1．用实时荧光定量PCR检测miR-191在胃癌中的表达情况，并分析与胃癌的临床病理特征的关系。 2.利用生物信息学软件预测miR-191的靶基因。 3.用免疫组化方法对靶基因在胃癌组织中表达情况进行检测，分析miR-191与靶基因表达情况的关系，为miR-191的后续功能研究提供重要依据。 方法： 1.选取胃癌及配对癌旁正常组织(距癌肿5cm以上)标本50例提取总RNA，逆转录成cDNA后，应用基于LNA技术的qRT-PCR（SYBR GreenⅠ染料法）及2-ΔΔCT相对定量法检测miR-191在胃癌及配对癌旁正常组织的表达情况。 2.按照不同的临床病理特征（性别、年龄、病理组织学分型、淋巴结转移和TNM分期）对胃癌病人进行分组，通过组间对比分析miR-191与各临床、病理指标的关系。 3.利用相关生物信息学软件（MiRanda、TargetScan及 PicTar）对miR-191进行靶基因预测，取3个软件均预测到的基因作为靶基因。 4.用免疫组化对靶基因在胃癌和配对癌旁正常组织中的表达情况进行检测，并分析与miR-191表达情况的相关性。 结果： 1.qRT-PCR结果显示：应用2-ΔΔCT进行相对定量分析，与配对癌旁正常组织相比，68％（34/50例）胃癌组织的miR-191呈高表达，miR-191在胃癌组织中的表达量0.0314（0.0037~0.4924）是配对正常组织0.0240（0.0037~0.1593）的2.01倍，有显著性差异（P<0.05）。 2.按性别、年龄、病理组织学分型、淋巴结转移和TNM分期对胃癌病人分别进行分组，各组间miR-191表达情况均无显著差异性（P>0.05）。 3.有9个基因在三个软件中均被预测为miR-191的靶基因，它们是：PLCD1、SOX4、RNF139、FZD5、GAP43、TJP1、TMOD2、NDST1和AMMECR1。 4.对胃癌及配对癌旁正常组织的PLCD1进行免疫组化检测，发现PLCD1均在上皮细胞胞浆染色表达。96.7%（29/30例）癌旁正常组织中的PLCD1表达呈（+）或（++），而胃癌组织中仅56.7%（17/30例）表达（+）或（++），差异有统计学意义（P<0.01）。与配对正常组织相比，70%（21/30）胃癌组织中的PLCD1表达阴性或强度下降。有90%（18/20例）miR-191表达增高的胃癌组织中PLCD1表达强度下降，而只有30%（3/10）miR-191表达降低的胃癌组织中 PLCD1表达强度下降。对miR-191与PLCD1在胃癌组织中表达水平进行相关性分析，结果显示两者呈显著负相关（r=-0.639，P<0.01）。 结论： 1.本实验应用基于LNA技术的qRT-PCR（染料法SYBR GreenⅠ）验证了miR-191在胃癌组织中呈高表达。 2. miR-191在胃癌组织中的表达量与相关的临床病理特征（性别、年龄、病理组织学分型、淋巴结转移和TNM分期）无相关性。 3.利用生物信息学软件预测了9个基因（PLCD1、SOX4、RNF139、FZD5、GAP43、TJP1、TMOD2、NDST1和AMMECR1）为miR-191的靶基因。 4.运用免疫组化方法观察到PLCD1在胃癌组织中呈低表达，并与miR-191在胃癌组织中的表达呈负相关。miR-191可能通过调控PLCD1对胃癌的发病起重要作用。