论文部分内容阅读
背景:神经退行性疾病严重威胁人类健康,但对其发病机制仍不够了解。小脑同样遭受退行性疾病的侵袭,而对其研究还没有引起足够的重视。氧化应激和炎症反应被普遍认为是神经退行性疾病主要的致病因素。神经调节蛋白1(Neuregulin1,Nrg1)主要通过表皮生长因子(ErbB)家族酪氨酸激酶受体发挥作用,参与神经发育的过程。在神经退行性疾病如帕金森氏病,阿尔茨海默症和肌萎缩性脊髓侧索硬化症都有关于Nrg1信号通路的研究。这些研究提示 Nrg1能帮助神经系统对抗退行性疾病中氧化应激和炎症反应造成的神经损伤,但对其作用机制的研究还不够深入。 目的: 1.验证在正常人小脑组织Nrg1和ErbB受体的作用关系; 2.研究APPSWE转基因模型小鼠小脑胶质细胞激活程度和炎症因子释放水平; 3.探究外源性Nrg1β对小鼠小脑颗粒细胞Nrg1信号通路的影响; 4.研究外源性Nrg1β在小鼠小脑氧化应激和炎症反应模型中发挥的作用。 方法: 1.采用正常人小脑组织芯片,运用免疫荧光染色来探讨小脑中Nrg1和磷酸化的ErbB4、ErbB2受体含量关系及共定位情况; 2.采用APPSWE转基因小鼠,运用免疫组织化学染色方法检测小脑中Iba-1、GFAP、IL1β和TNFα水平的变化。 3.使用原代培养的小鼠小脑颗粒神经元,在H2O2以及LPS分别诱导的细胞毒性条件下用外源性Nrg1β处理,用蛋白免疫印迹方法和细胞免疫荧光检测pErbB4、pErbB2和pAkt1/Akt1、pErk/Erk的水平; 4.小鼠腹腔注射LPS和外源性Nrg1β,运用蛋白免疫印迹方法检测ErbB4,ErbB2和Akt1、Erk1/2磷酸化的水平,运用免疫组织化学和组织免疫荧光检测Iba-1、GFAP、IL1β和TNFα水平的变化。 结果: 1.在正常人小脑中,Nrg1和pErbB4、pErbB2的水平存在显著的正相关性,并且有共定位表达情况; 2.在一年和两年龄的APPSWE转基因小鼠小脑,Iba-1、GFAP和IL1β水平均有升高;TNFα水平在一年龄时变化不明显,两年龄时水平升高; 3.原代培养的小鼠小脑颗粒细胞用外源性Nrg1β处理后,ErbB4、ErbB2、Akt1和Erk1/2磷酸化水平呈剂量依赖性升高; 4.原代培养的小鼠小脑颗粒细胞用H2O2或LPS处理后,蛋白免疫印迹法检测结果显示ErbB2、Akt1和Erk1/2磷酸化水平降低,给予外源性Nrg1β后则上述蛋白磷酸化水平升高;H2O2处理后pErbB4的水平降低,给予外源性Nrg1β后其水平升高,LPS处理后pErbB4的水平升高,给予外源性Nrg1β后其水平进一步升高。运用细胞免疫荧光检测pErbB4和pErbB2水平,结果与蛋白免疫印迹法检测结果一致; 5.在LPS对小鼠造成炎症反应后的小脑内,pErbB4、pErbB2和pAkt1/Akt1的水平下降,而给予外源性Nrg1β治疗的小鼠,LPS诱导的炎症反应对三者的影响被逆转; 6.Nrg1β降低了炎症反应模型小鼠小脑中Iba-1、GFAP和IL1β水平,而对TNFα的水平没有影响。 结论: 1.在正常人小脑组织中,Nrg1能够激活ErbB4和ErbB2受体; 2.小脑中炎症反应参与阿尔茨海默症病理改变; 3.Nrg1β能够通过激活ErbB4和ErbB2受体进而激活Akt1和Erk1/2两个信号通路发挥作用; 4.氧化应激和炎症反应抑制Nrg1下游信号通路,而外源性Nrg1β能够逆转该影响,从而减轻两种致病因素对神经元的损伤; 5.Nrg1β能减少小脑激活型小胶质细胞和星形胶质细胞的数量并对抗促炎因子IL1β的释放,减轻炎症反应。综上所述,Nrg1信号通路在小鼠小脑氧化应激和炎症反应中起神经元保护作用,为治疗与AD等有关的小脑神经炎症反应病变提供了参考。