海带硫酸多糖的提取纯化降解及活性研究

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海带多糖是海带中的重要功能性物质,主要包括褐藻胶、褐藻糖胶、褐藻淀粉三种。其中褐藻糖胶是一种硫酸化多糖,有多种生物活性和药理作用,在调节免疫、抗肿瘤、抗凝血、抗血脂、降血糖、抗辐射、抗突变、抗体内氧化和耐缺氧等方面具有独特的功能。本研究通过对多糖萃取条件及树脂脱色条件的探讨,以期获得一种经济、简便的海带硫酸化多糖纯化方法;通过对超声波降解多糖条件的研究,找到一种新型的海带硫酸化多糖的降解方法,提高天然提取物质的利用价值,有利于更好地综合利用我国丰富的海洋资源,提高我国海洋产品的技术含量,为新药和保健食品的开发作出贡献。本文采用水提法与酶解法分别对海带硫酸化多糖进行提取,并比较提取率;通过CTAB萃取以及大孔树脂脱色对多糖进行初步纯化,确定CTAB萃取的最佳条件并筛选最佳脱色树脂以及树脂脱色最适条件。采用超声波降解,以超声功率、多糖浓度和超声波作用时间为多糖降解的影响因素,并设计三因素三水平的正交分析实验,对降解工艺进行优化。采用超声波与H2O2联合降解的方法降解多糖,并与H2O2单独作用效果进行比较。LPS经降解后用乙醇分级,采用小鼠肝匀浆自发性脂质过氧化、诱导小鼠肝脂质过氧化、清除超氧阴离子自由基作用实验,对硫酸化多糖降解后组分L3、HSL5的抗氧化活性进行研究,并通过MTT法检测细胞存活率、Hoechst33258荧光染色实验,比较两个多糖组分对肿瘤细胞A549生长抑制的活性。结果表明:酶提法多糖粗提得率较水提法提高了85.9%,纯化后得率提高了43.6%。纯化过程中,通过正交实验得出CTAB沉淀LPS的最佳优化条件为1%粗糖液:5%CTAB(V/V)为3∶2,沉淀时间6h,离心时间12min。经单因素实验确定了树脂D315的脱色条件为:1%多糖液与树脂的体积质量比为100∶1(V/W),脱色时间6h,pH值5.0,温度40℃。超声波降解最佳工艺条件为:超声波功率为200W、多糖浓度为1mg/ml、超声作用时间为15min,得到降解产物的特性粘度为0.987ml/mg、粘均分子量为46.4KD,超声波可以有效降解LPS,降解之后LPS的多糖含量、硫酸根含量及结构基本没有变化。超声波辅助H2O2降解多糖2h与H2O2单独降解6h效果相同,粘均分子两可达到1万以下。LPS经降解后抗氧化性与抑制肿瘤细胞生长活性都有不同程度的提高,其中,HSL5抗氧化性优于L3,L3比HSL5对肿瘤细胞A549具有更强的生长抑制作用。结论:1酶解法是一种高效提取LPS的方法。2粗多糖经CTAB萃取、大孔树脂脱色后能够达到理想的纯化效果。3超声波法可以有效的降解LPS,降解产物的抗氧化性与肿瘤细胞生长抑制活性都有提高。
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