单胺氧化酶抑制剂苯乙肼对套细胞淋巴瘤的组蛋白甲基化及Wnt信号通路的调控研究

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【目的】:研究单胺氧化酶抑制剂苯乙肼在体外对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞组蛋白甲基化及Wnt信号通路的影响,探讨其可能的作用机制。【方法】:(1)应用MTT比色法检测苯乙肼对Jeko-1细胞增殖抑制率的影响;流式细胞术观察细胞凋亡的变化。(2)应用蛋白免疫印迹法(Western Blot)观察苯乙肼作用后Jeko-1细胞的凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax及P21蛋白表达水平的变化,组蛋白H3K4单甲基化、双甲基化、三甲基化及组蛋白H3乙酰化状态的变化。同时研究Wnt信号转导通路相关蛋白表达水平的变化。【结果】:(1)单胺氧化酶抑制剂苯乙肼抑制Jeko-1细胞增殖,苯乙肼5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L作用24h后,Jeko-1细胞增殖抑制率分别为(10.43±1.85)%、(36.54±4.34)%、(43.52±3.37)%、(80.05±3.56)%,P<0.05;随浓度的增加,细胞增殖抑制率不断增加。(2)苯乙肼可上调细胞凋亡相关蛋白Bax,表达凋亡及执行蛋白procaspase-3,细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白P21表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2;苯乙肼浓度分别为0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L作用24小时后, Jeko-1细胞的凋亡率分别为(3.64±1.52)%、(17.64±3.46)%、(30.14±3.16)%、(52.45±5.31)%,随着苯乙肼浓度的增加,凋亡率逐渐上升,表现为浓度依赖性。(3)苯乙肼上调Jeko-1细胞组蛋白H3K4me1、H3K4me2甲基化水平及H3乙酰化水平,而组蛋白H3K4me3水平无明显改变。(4)苯乙肼处理24小时后Jeko-1细胞的WNT通路蛋白p-GSK-3β、β-catenin、c-myc、cyclinD1表达均下降。【结论】:(1)单胺氧化酶抑制苯乙肼能明显抑制Jeko-1细胞的增殖,可能与上调P21有关。(2)苯乙肼可诱导Jeko-1细胞凋亡,可能与下调Bcl-2及上调Bax表达,启动效应蛋白caspase-3有关。(3)苯乙肼可提高与常染色体有关的组蛋白H3K4单甲基及二甲基化,并提高组蛋白H3乙酰化水平,但对H3K4三甲基化无影响。(4)苯乙肼能抑制Wnt/β-catenin信号转导通路,可能与组蛋白甲基化有一定的关系。
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