大豆（Glycine max（L.）Merr.）作为全球范围内重要的粮饲兼用作物,因含有丰富的营养资源,在人类生活中占有举足轻重的地位。土壤盐渍化是威胁作物生产的世界性生态问题,尽管大豆是中等耐盐作物,但盐胁迫仍然影响大豆的品质和产量。因此研究大豆的盐胁迫应答过程,有助于培育优良的耐盐品种,对于增加粮食产量、合理利用边际土地及改善生态环境具有重大意义。micro RNAs（miRNAs）作为一类单链非编码RNA分子,在植物盐胁迫应答过程中扮演重要角色。本研究利用遗传学与分子生物学等技术手段鉴定到三个参与大豆盐胁迫应答的miRNA,分别为miR164d、miR164g和miR164k,并对它们的生物学功能进行了初步解析,具体研究结果如下:1.结合CRISPR/d Cas9与大豆瞬时毛状根转化技术,获得miR164d、miR164g和miR164k敲低表达的转基因复合植株,并进行盐胁迫处理,发现它们的根相对伸长率只有对照组的0.16～0.35倍。另外,过表达miR164g和miR164k的转基因复合植株在盐胁迫下的根相对伸长率分别达到对照组的1.3和1.5倍。表明miR164d、miR164g和miR164k正调控大豆的盐胁迫应答过程。2.盐胁迫下的基因表达模式分析,发现miR164d、miR164g和miR164k均被盐胁迫诱导表达,其表达水平在处理6 h达到最高,升高了6～20倍;组织特性性表达分析,发现miR164d、miR164g和miR164k在根、茎、叶和花中均有表达且在叶片中高表达。3.华春6号为背景,利用CRISPR/Cas9基因编辑系统和大豆遗传转化体系,获得了miR164d、miR164g和miR164k的转基因敲除植株。通过筛选获得两个miR164d、一个miR164g和两个miR164k的纯合突变体株系。并且这两个miR164d突变体株系中,miR164d的表达量分别只有野生型的0.3倍和0.25倍。综上所述,本研究发现miR164d、miR164g和miR164k正调控大豆盐胁迫响应,这为将来培育耐盐大豆新品种提供一定的理论基础和基因资源。