慢性乙型肝炎病毒感染者特异性T淋巴细胞应答与临床转归

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[目的]:研究乙型肝炎病毒(HBV)感染后不同临床转归的人群之间HBV特异性T淋巴细胞应答的差异,探讨慢性HBV感染的免疫学发病机制,为进一步研究乙肝的治疗方法及疫苗研发提供依据。[方法]:从HBV感染者中选取慢性肝炎患者及携带者,在健康人群中招募乙肝康复者及注射疫苗人群,研究对象入选标准依据《慢性乙型肝炎防治指南2010版》。采集研究对象外周血标本分离外周血淋巴细胞(PBMC),以不加抗原的培养基作为空白对照,以人类免疫缺陷病毒HIV-p24抗原作为阴性对照,植物血凝素(PHA)作为阳性对照,分别用HBsAg, HBcAg及覆盖HBcAg全长的肽段库作为特异性抗原刺激并培养细胞。采用CFSE染色及流式细胞术的方法检测细胞增殖情况。经多色流式细胞术标记细胞表面CD3、CD4、CD8及CD45RA、CCR7,检测不同亚群淋巴细胞的增殖及分化情况。[结果]:按照入组标准共选取了43人入组,其中慢性乙型肝炎患者10人,携带者10人,乙肝感染后康复者13人,注射疫苗对照组10人。结果发现T细胞对乙肝S抗原的特异性增殖较好,而HBcAg及HBcAg肽段库刺激下的T细胞均未发生明显增殖。各组对HBsAg的增殖存在显著性差异,其中乙肝康复者中发生了特异性T细胞增殖的比例为3.40%(1.65%,25.30%),要显著好于慢性乙型肝炎组的1.25%(0.08%,3.50%)及携带者组的0.40%(0.00%,3.68%),慢性肝炎组与携带者组之间无明显差异。对发生特异性增殖的T细胞进一步分析,发现CD45RA-CCR7+T细胞比例最高,且各组间存在统计学差异。乙肝康复者组中发生增殖的CD45RA-CCR7+T细胞的比例为52.61%±8.80%,要高于慢性肝炎组的48.06%±13.75%及携带者组的42.03%±13.78%,并与携带者组之间有显著性差异。[讨论]:本研究提示慢性HBV感染者可能存在特异性T细胞的应答缺陷,其对乙肝抗原的特异性增殖要弱于乙肝康复者;T细胞对HBsAg的特异性增殖要好于HBcAg;发生增殖的T细胞中,CD45RA-CCR7+亚群具有重要的作用,其增殖的强弱可能对HBV感染后的临床转归有一定的作用。
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