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藻蓝蛋白是一种天然色素蛋白,不仅可作为天然蓝色色素用于食品、保健品、化妆品等领域,而且,藻蓝蛋白还具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤和提高免疫等生理功能而广泛应用于医药保健领域。同时,藻蓝蛋白因其强烈的荧光性能可制成荧光探针和光敏剂,用于医疗诊断、免疫学、生物工程和其他研究领域,具有很高的理论研究价值和开发利用价值。本论文以螺旋藻为原料,研究了藻蓝蛋白的提取、分离纯化和稳定性,并对藻蓝蛋白荧光探针用于免疫层析快速检测试纸条进行了初步探索。采用振荡法提取藻蓝蛋白,通过单因素实验和响应面法优化藻蓝蛋白的提取条件,优化结果为:提取温度32℃,提取时间2.38h,液料比1:32.7(g/mL),提取率达到76.01%。藻蓝蛋白的分离纯化主要包括四个步骤:膜分离、两步硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose FF离子交换层析和Sephadex G-150凝胶层析。经过膜分离,藻蓝蛋白粗提液的纯度由0.42提高到2.75,达到食品级(A620nm/A280nm>0.7),回收率可达91.88%。采用两步硫酸铵盐析进一步纯化,纯度可提高到3.65,达到医药级(A620nm/A280nm>3.0),回收率为74.79%。经离子交换层析和凝胶层析纯化后,藻蓝蛋白的纯度为5.04,可达到生化试剂级(A620nm/A280nm>4.0),回收率为35.50%。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表明,螺旋藻中藻蓝蛋白含有α、β两个亚基,分子量分别为16.6和21.2 kDa。同时,采用高效凝胶排阻色谱法(HPSEC)对藻蓝蛋白分子量进行分析表明,在pH值为7.0时,螺旋藻中藻蓝蛋白主要以(αβ)3三聚体的形式存在,占比95.46%,其分子量约为91 kDa。藻蓝蛋白的稳定性结果表明,在30℃以下低温、pH值为中性、避紫外光的条件下有利于藻蓝蛋白的稳定性。基于藻蓝蛋白的荧光特性,本文制备了藻蓝蛋白荧光探针,并采用竞争免疫层析技术,建立了一种快速检测黄曲霉毒素B1的方法,结果表明黄曲霉毒素B1免疫层析快速检测试纸条的灵敏度为20 ng/mL。该法操作简单快捷,适用于现场大批量样品的快速检测。