【摘 要】
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本文通过基因工程手段利用SOE方法,对其进行改造,IL-18第39精氨酸残基和第40天冬氨酸残基之间插入一个甘氨酸残基,从而构建了RGD模体,并将此突变的cDNA片段构建于质粒pPIC9K,
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本文通过基因工程手段利用SOE方法,对其进行改造,IL-18第39精氨酸残基和第40天冬氨酸残基之间插入一个甘氨酸残基,从而构建了RGD模体,并将此突变的cDNA片段构建于质粒pPIC9K,电击转化入毕赤酵母GS115中,进行分泌型表达,对表达产物进行用SephadexG-100凝胶过滤纯化表达产物,获得初步纯化的蛋白。对该纯化蛋白Western-blot分析具有相同的灰度,说明选择的抗体与IL-18识别位点不在RGD位置附近。
为了检验突变后对IL18原有的功能的影响,研究选择了表达产物体外诱导人PBMC产生IFN-r这一指标,结果显示,突变前后没有发生改变,说明我们构建RGD模体的位点没有影响其原来的生物活性。
综上所述,此IL-18RGD嵌合体在具有抗炎,抗感染的同时,增添了RGD模体所具有的功能。
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