小鼠锌指蛋白基因ZF-12的克隆与结构分析及ZNF191转基因小鼠和ZF-12基因剔除嵌合体小鼠的建立

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我们首先以人锌指蛋白基因ZNF191的cDNA为探针,筛选小鼠λ噬菌体基因组文库,意外地首次获得了一个与ZF-12基因相关的无内含子的假基因序列,以ZF12p(ZF-12 pseudogene)命名在GenBank登录(AY040222).多种组织的RT-PCR和启动子序列分析,暗示该基因不表达,且无内含子,与ZF-12高度相似.查寻GenBank的人类基因组库以及基因组Southern杂交结果显示人类基因组中无ZNF191假基因序列.另外,以ZF-12假基因的HindⅢ片段为探针,筛选小鼠基因组文库,首次获得了小鼠锌指蛋白ZF-12基因组全序列,并在GenBank登录(AY052495).利用小鼠锌指蛋白ZF-12基因组DNA片段,构建了3个针对小鼠ZF-12基因位点的替换型打靶载体.进行了ZF-12<+/->杂合子ES细胞囊胚腔显微注射,获得了4只嵌合体小鼠(3只雄性,1只为雌性),其中1只雄性小鼠毛色嵌合率约50﹪,其余3只毛色嵌合率约30﹪.原核显微注射了582个受精卵,产下81只小鼠,获得了4只PCR和基因组Southern杂交阳性的ZNF191转基因小鼠.这些研究为进一步阐明ZNF191或ZF-12的生理功能创造了必要的条件.
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