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目的:以RNA适配体EpDT3修饰携载抑癌基因磷酸酶及张力蛋白同源基因(Phosphatase and tensin tomologue gene,PTEN)的重组腺病毒(Ad5-PTEN)制备一种新型基因靶向给药系统EpDT3-PEG-Ad5-PTEN(EPAP),克服Ad5-PTEN的免疫原性强和靶向性低以及EpDT3的稳定性差等缺点,延长药物的循环时间,增强药物的靶向性,并初步验证EPAP对HepG2肝癌的抑制作用;拟考察EPAP能否提高其血清稳定性和基因转染率,能否改变HepG2细胞的形态并抑制其增殖和迁移,能否抑制肿瘤生长并降低毒副作用。方法:本研究以双功能聚乙二醇(Ployethylene Glycol,PEG)为连接臂,利用酰胺反应原理,将上皮细胞粘附分子(Epithelial cell adhesion molecule,EpCAM)适配体EpDT3与Ad5-PTEN偶联制备EPAP。PEG-Ad5-PTEN经SDS-PAGE电泳确认而EPAP经荧光强度检测、粒径及Zeta电位测定和TBE-PAGE电泳鉴定后,以人胚肾细胞(human embryonic kidney,HEK293)为模型,测定EPAP的血清稳定性;以EpCAM阳性的HepG2细胞和人正常肝细胞L-02为模型,分别给予生理盐水(Saline)和用携载报告基因LacZ的重组腺病毒,以与EPAP同样方法制得的EpDT3-PEG-Ad5-LacZ(EPAL),评估EPAP的基因转染效率以及细胞摄取;分别给予EpDT3、5-氟尿嘧啶(5-FU)、Ad5-PTEN和三组不同剂量的EPAP,以观察HepG2的形态改变,并检测HepG2、EpCAM阴性的HEK293细胞和L-02的细胞活力以及HepG2的迁移能力。随后,通过小鼠体内急性毒性实验对EPAP的毒副作用进行考察。最后,构建HepG2裸鼠异位瘤模型,对EPAP的组织摄取以及EPAP的抗肿瘤活性进行评价。结果:实验结果表明,Ad5-PTEN的PEG化效率为95.2±4.58%,EPAP的产率约为80-90%,其粒径和Zeta电位分别为98.26±2.85 nm and-21.56±9.75 mV。体外实验表明,EPAP的血清稳定性和基因转染效率均得到了极大提高;EPAP能特异性靶向HepG2肝癌细胞和肿瘤组织而对正常肝细胞没有靶向性,且HepG2细胞对EPAP的摄取明显高于L-02;EPAP能显著改变体外HepG2肝癌细胞的形态并降低其活力和迁移能力,而对HEK293细胞和正常肝细胞的活力却无明显影响。体内急性毒性实验表明,高剂量EPAP(1.73×10~100 PFU/ml)对小鼠肝脏有轻微毒性,而低、中剂量EPAP对实验小鼠均无明显毒副作用。EPAP能抑制裸鼠异位瘤的生长与分化。结论:本研究成功构建了靶向基因给药系统EPAP,其在体内外均能特异性靶向EpCAM阳性肝癌细胞,并抑制其增殖和迁移,具有抗肿瘤活性,能抑制HepG2肝癌的生长和分化。低、中剂量的EPAP更适用于抗肝癌治疗。