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目的观察雷公藤多苷(Tripterygium glycosides,TG)和肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)抑制剂昼夜不同时间给药对大鼠胶原诱导关节炎(Collagen-induced arthritis,CIA)的治疗作用及其炎性细胞因子、生物钟基因蛋白表达的影响,为临床开展类风湿关节炎(RA)的时间治疗提供实验依据。方法1 CIA造模及分组:Wistar大鼠,雄性80只,饲养于时间生物学实验室,明期为08:00~20:00,暗期为20:00~08:00,驯化10天后进行CIA造模,造模成功的大鼠通过进行随机分组,TG组分为早8:00(ZT0)组与晚8:00(ZT12)组;TNF抑制剂为早8:00(ZT0)组与晚8:00(ZT12)组,TG组灌胃(10mg/kg),1/日;TNF抑制剂组皮下注射(6mg/kg),1/周,持续给药28天;空白组与模型组等量的羧甲基纤维素钠灌胃。干预结束后,留取标本。2实验方法:在治疗开始后每周使用足趾容积测量仪测量大鼠关节容积变化;在治疗28天后,拍各组大鼠双足或前爪正位X线片,处死大鼠,留取血清,检测TNF-α和白介素-6(interleukin-6,IL-6)表达水平;留取各组大鼠踝关节,在显微镜下观察大鼠踝关节滑膜组织病理形态,并采用免疫组织化学法检测关节滑膜TNF-α、IL-6、IL-17 A、BMAL1及CLOCK表达水平;药物干预结束后,对实验数据进行统计学分析。3统计方法:使用IBM SPSS21.0软件进行分析,符合正态分布计量资料均采用均数±标准差(x±s)表示。多组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)处理;两两比较,方差齐时采用LSD法检验;方差不齐时采用Dunnett’s T3法检验,检验标准为α=0.05。结果1各组大鼠足趾容积的变化:空白组大鼠足趾容积无明显变化,模型组大鼠足趾容积呈增长趋势。TG组比较,发现TG-ZT12组的足趾容积小于TG-ZT0组,治疗4周后,TG-ZT12组的足趾容积小于模型组(P<0.05);TNF抑制剂-ZT0组足趾容积则小于TNF抑制剂-ZT12组,治疗4周后,TNF抑制剂-ZT0组足趾容积则小于模型组(P<0.05)。2各组大鼠踝关节X线观察:空白组大鼠踝关节的X线未见异常。模型组双踝关节关节面骨质不均,可见明显缺损,掌指关节可见块状骨缺损,关节间隙明显变窄。TG两组比较,ZT12组关节损伤轻于T0组。TNF抑制剂两组比较,ZT0组关节损伤轻于ZT12组。3各组大鼠血清TNF-α和IL-6水平:干预结束后,与模型组相比,TG两组与TNF抑制剂两组血清TNF-α和IL-6水平显著下降(P<0.05)。TG-ZT12组血清TNF-α和IL-6水平显著低于TG-ZT0组(P<0.05)。TNF抑制剂-ZT0组血清TNF-α和IL-6水平显著低于TNF抑制剂-ZT12组(P<0.05)。4各组CIA大鼠踝关节病理学观察:空白组大鼠踝关节病理染色未见异常。模型组大鼠踝关节病理染色可见滑膜细胞严重增生,出现炎细胞大量浸润及乳头状突起。TG-ZT12组与TG-ZT0组比较,炎细胞浸润少见和滑膜细胞增生较轻;TNF抑制剂ZT0组与TNF抑制剂ZT12组比较,炎细胞浸润少见和滑膜细胞增生较轻。5免疫组织化学检测TNF-α、IL-6、IL-17A、BMAL1及CLOCK在大鼠踝关节的表达观察:免疫组织化学法检测发现模型组大鼠踝关节滑膜细胞的炎性细胞因子TNF-α、IL-6及IL-17 A表达水平均显著高于空白组;同时TG-ZT12组比TG-ZT0组及TNF抑制剂ZT0组与TNF抑制剂ZT12组比较,滑膜细胞TNF-α、IL-6及IL-17 A表达均有不同程度下降。昼夜节律蛋白BMAL1和CLOCK表达与炎性细胞因子相似,TG-ZT12组比TG-ZT0组及TNF抑制剂ZT0组与TNF抑制剂ZT12组比较,表达均有不同程度下降。结论1 TG和TNF抑制剂均能有效减轻关节肿胀,抑制炎性细胞因子,减轻CIA大鼠踝关节影像学进展,减少昼夜节律蛋白BMAL1和CLOCK表达。2多靶点抗风湿药-TG与单靶点抗风湿药-TNF抑制剂早晚最佳疗效时间存在差异。