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第一部分济南地区无偿献血者中血源性传播病毒感染的流行病学调查目的:检测济南地区无偿献血者血浆中乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、抗丙型肝炎病毒(HCV)抗体、抗人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体以及抗人疱疹病毒8型(HHV-8)IgG抗体,分析我国济南地区献血人群中相关病毒的感染情况和流行病学特点;为济南地区无偿献血人群的选择和制定招募安全血源的策略提供理论依据。方法:1.血清学检测1.1利用ELISA方法对2006年1月～2006年12月无偿献血者的血浆标本(43904份)进行HBsAg、抗-HCV、抗-HIV的检测;抗-HIV检测呈阳性者送山东省疾病预防控制中心进行Western-Blot确认。1.2利用ELISA方法对其中520份献血者血浆进行抗-HHV-8 IgG抗体的检测,包被抗原为HHV-8结构蛋白ORF K8.1合成多肽。2.统计学处理2006年1月～2006年12月的献血者基本资料和各项试验检测的结果应用SPSS10.0统计软件包进行统计学分析。统计学方法采用x~2检验。结果:1.43904份献血者血浆中HBsAg检出率为2.04%(898/43904),抗-HCV检出率为0.78%(344/43904),抗-HIV检出率为0.0045%(2/43904)。520份献血者血浆中抗-HHV-8检出率为5.962%(31/520)。2.统计学分析结果显示,HBsAg、抗-HCV检出率在不同年龄组间的差异无统计学意义(P＞0.05),在不同职业间的差异有统计学意义(P＜0.05);男性献血者中HBsAg的检出率高于女性,差异有统计学意义(P＜0.05);不同性别、年龄献血者血浆中抗-HHV-8的检出率差异无统计学意义(P＞0.05)。结论:济南市无偿献血者中存在一定比率的HCV感染者及相对较高的HBV、HHV-8感染者,同时尚存在个别HIV感染者。在以后的血液筛查工作中有必要进一步提高检测方法的准确度以及加强招募前的筛查工作,以不断提高输血安全。第二部分人疱疹病毒8型ORF73C基因原核表达载体的构建目的:构建人疱疹病毒8型ORF73C基因原核表达载体,为下一步的基因表达及重组蛋白诊断试剂盒的制备奠定基础。方法:根据HHV-8 ORF73C基因序列和相关文献设计PCR引物,在引物的5’端分别引入限制酶Bam HI和HindⅢ酶切位点,以含有HHV-8 ORF73基因片段的重组质粒pcDNAHis.LANA1为模板,利用PCR方法扩增HHV-8 ORF73C基因,克隆至pGEM T-easy载体,并进一步克隆至原核表达载体pET30(a+)中,构建原核表达质粒pETORF73C。结果:1.琼脂糖凝胶电泳证实PCR扩增产物为目的基因(HHV-8 ORF73C)。2.DNA测序证实HHV-8 ORF73C原核表达载体pETORF73C构建成功。结论本研究成功构建了含有HHV-8 ORF73C抗原表位的原核表达质粒pETORF73C,为以后的重组蛋白制备奠定了基础。