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鸡球虫病是由艾美耳球虫引起的一种对鸡危害极为严重的全球性寄生虫病,目前仍以药物防治为主。由于球虫耐药株的不断出现,研制新药的费用昂贵和药物残留的日趋严重,使得球虫分子生物学方面的研究成为热点。最近的研究证明主要由堆型艾美耳球虫感染引起的亚临床型球虫病给养鸡业造成的损失有时要比临床型球虫病大的多,因此有必要对堆型艾美耳球虫进行专门详尽的深入研究。本文建立了天然鼠源噬菌体抗体库,并利用堆型艾美耳球虫裂殖子抗原筛选出了特异性的单链抗体,并进行了鉴定,为鸡球虫病的免疫控制研究提供新的工具,为研究球虫抗体的成熟和表达控制奠定了基础。本试验采用BALB/c小鼠,提取其脾脏的总RNA,以提取的RNA为模板,利用引物Oligo（dT）15合成cDNA。根据小鼠抗体可变区的恒定区的氨基酸序列设计合成兼并引物,并以cDNA为模板,扩增轻链可变区和重链可变区基因。经琼脂糖凝胶电泳检测轻链可变区基因的大小约390bp,重链可变区基因大小约420bp。从琼脂糖凝胶上切下所需DNA片段,用回收试剂盒回收轻链、重链可变区基因,经琼脂糖凝胶电泳检测回收产物,将回收的轻链基因等量混合,制成轻链可变区基因文库;同样将回收的重链基因等量混合,制成重链可变区基因文库。将轻链和重链可变区基因经重叠延伸拼接PCR（SOE-PCR）反应,构建成单链抗体（ScFv）基因,并在两端引入SftⅠ和NotⅠ酶切位点。对单链抗体基因进行克隆、鉴定和序列测定,结果显示ScFv大小约为750bp,ScFv基因符合鼠抗体ScFv基因特征,与预期结果一致。将构建的单链抗体双酶切后连接到噬菌体载体PCANTAB-5E中,转化入大肠杆菌TG1中,经辅助噬菌体M13KO7的拯救,构建成天然鼠源噬菌体抗体库。对噬菌体抗体库进行亲和富集筛选后,用ELISA方法鉴定抗鸡堆型艾美耳球虫裂殖子单链抗体的结合活性,结果筛选出与鸡堆型艾美耳球虫裂殖子抗原结合活性较高的克隆。将强阳性重组噬菌体克隆感染大肠杆菌HB2151,经IPTG诱导表达可溶性ScFv抗体,用SDS-PAGE测定可溶性抗体分子量的大小,结果显示分子量为32KD左右。结果证明,成功构建了天然鼠源噬菌体抗体库,并且通过噬菌体抗体库得到了鸡堆型艾美耳球虫裂殖子特异性的ScFv基因。