侵袭和转移是恶性肿瘤最显著的生物学标志,也是临床上导致患者死亡的最重要因素。肿瘤血行转移不仅要逃避机体的免疫监视,还必须抵抗血流切应力被捕获才能在组织中定位、生长。至今尚未从根本上阐明恶性肿瘤转移的发生机理。近十年来的研究证实,血小板及其粘附分子在恶性肿瘤血行转移中发挥了重要作用,肿瘤细胞抗血流切应力的捕获,是肿瘤血行转移的先决条件,被捕获的肿瘤细胞和血小板、白细胞通过粘附分子以及血浆中的介质发生相互作用,形成微小癌栓,再与转移部位的血管内皮细胞进行粘附,从而介导肿瘤细胞穿过血管内皮进入组织间隙定位、侵袭和生长,完成转移过程。血小板是血栓形成的最关键因子,血小板和肿瘤细胞的相互作用,涉及多个过程和不同的粘附分子。 郭峰等首次发现各种癌细胞传代株普遍都可以旁路激活补体,并粘附补体C3b,钱宝华等发现血小板膜表面表达大量的 CD35(Ⅰ型补体受体,CR1)分子。从理论上推测 CD35 分子能够介导血小板和肿瘤细胞发生天然免疫粘附,CD35分子可能是血小板和肿瘤细胞相互作用的重要桥梁。临床研究表明,大多数恶性肿瘤患者血液都处于高凝状态,这和血小板活化程度密切相关,CD62P 分子(P-选择素)是血小板活化的重要标志,可以加强肿瘤细胞和血小板的粘附作用,而且对于肿瘤细胞在血管中的滚动和侵润作用,具有重要意义。研究证实,恶性肿瘤患者红细胞 CD35、CD44 分子的表达比正常人显著减少,红细胞对肿瘤细胞的天然免疫功能下降,抑制肿瘤转移的作用降低,提示红细胞 CD35、CD44 分子在肿瘤转移过程中具有重要的抑制作用。血小板和红细胞在肿瘤免疫反应中可能发挥了不同的作用。 本课题建立血小板免疫粘附肿瘤细胞 S180 的方法,研究了恶性肿瘤患者和正常人血小板免疫粘附 S180 细胞能力的差异,探讨其在血小板和恶性肿瘤细胞相互作用中的意义;应用流式细胞技术测定了恶性肿瘤患者和正常人血小板、红细胞粘附分子 CD35、CD44、CD62P 的表达情况,研究了各实验人群三种粘附 - 2 -<WP=6>第二军医大学硕士学位论文 中文摘要分子表达差异以及相关性的变化,探讨这些变化和差异在恶性肿瘤血行转移中的生物学意义。本课题为抑制恶性肿瘤的血行转移提供了新的实验依据,并为防治肿瘤的血行转移提供了新思路。第一部分 血小板免疫粘附肿瘤细胞 S180 方法的建立及临床初步应用(一)目的 建立血小板免疫粘附肿瘤细胞 S180 的方法,比较 ACD 和 EDTA抗凝后血小板免疫粘附 S180 细胞能力的差异,以及恶性肿瘤患者和正常人血小板免疫粘附 S180 细胞能力的差异,探讨这些差异在血小板和肿瘤细胞相互作用中的意义,及其临床应用价值。(二)方法 将 S180 细胞加入富含血小板血浆(PRP)中,37。C 水浴孵育 1.5h,戊二醛固定后水平涂片,瑞氏染色,高倍显微镜下观察,以一个癌细胞结合三个或三个以上血小板为一个花环,计数 100 个肿瘤细胞,计算各组血小板花环形成率。(三)结果 10 例正常人 ACD 抗凝后的血小板花环形成率(27.0±3.30)%高于 EDTA 抗凝后的血小板花环形成率(11.1±2.38)%,两组间有显著的统计学差异(P<0.01);30 例恶性肿瘤患者血小板花环形成率(38.6±6.04)%高于 30 例正常人血小板花环形成率(29.3±3.44)%,两组间有显著的统计学差异(P<0.01)。(四)结论 血小板能够免疫粘附 S180 肿瘤细胞。用 EDTA 灭活血浆中的补体后,血小板花环形成率明显下降,提示 CD35 分子在介导血小板和肿瘤细胞的粘附中发挥了重要作用。恶性肿瘤患者血小板花环形成率明显高于正常人,而且和肿瘤的恶性程度以及全身转移有关。本实验建立的血小板免疫粘附 S180 细胞的方法,可以在临床上作为判断恶性肿瘤患者预后的一个辅助诊断方法。本实验方法简便,易于在临床上推广。第二部分 血小板、红细胞粘附分子 CD35、CD44、CD62P 表达的实验检测及 其生物学意义(一)目的 研究恶性肿瘤患者血小板以及红细胞 CD35、CD44 和 CD62P 分子的表达与正常人的差异,探讨这种差异在恶性肿瘤生长和转移中的生物学 - 3 -<WP=7>第二军医大学硕士学位论文 中文摘要意义。(二)方法 静脉采集 30 例健康献血者和 30 例恶性肿瘤患者全血,ACD 抗凝后离心,制备 PRP 和红细胞悬液,应用流式细胞仪测定各组血小板和红细胞 CD35、CD44 和 CD62P 的表达情况。(三)结果 恶性肿瘤患者血小板 CD35、CD44 和 CD62P 的平均荧光强度(85.85±51.97、10.08±6.53、14.97±8.44)明显高于正常人(62.87±46.38、7.12±3.92、7.10±2.98);肿瘤患者红细胞 CD35、CD44 平均荧光强度(41.34±30.71、193.41±124.32)明显低于正常人(60.28±36.90、318.85±123.79),红细胞 CD62P(23.97±18.80)和正常人(16.30±11.12)相比无显著差异。(四)结论 恶性肿瘤患者血小板 CD62P 明显高于正常人群,反映肿瘤患者血小板活化程度较高,促进了肿瘤细胞和血小板之间的相互作用。血小板CD35、CD44 分子水平也显著高于正常人,提示这两种分子也可能参与了血小板和肿瘤细胞的相互作用。恶性肿瘤患者红?