研究猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2, PCV2)对仔猪淋巴细胞分泌IL-4和IL-12动态影响及其调控的信号途径,旨在进一步了解PCV2引起仔猪免疫抑制的机制及防治PCVD的新策略。选取8头PCV2和猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)血清抗原、抗体均为阴性的普通断奶仔猪,无菌取其脾脏制成单细胞悬液后,随机分为4组：对照组、NF-κB抑制剂组(抑制剂组)、PCV2组和NF-κB抑制剂-PCV2组(抑制剂-PCV2组),进行体外培养,并于0、6、12、24和48 h收获悬浮的淋巴细胞及细胞培养上清液。间接免疫荧光法(IFA)定位检测PCV2感染淋巴细胞的情况和核因子κB (nuclear factor kappa B, NF-κB).入核情况；流式细胞仪定量检测PCV2感染淋巴细胞比例；利用ELISA法检测细胞培养上清液中IL-4、IL-10和IL-12的蛋白含量；Western blot定量检测细胞核中NF-κB/p65,细胞浆中髓样分化因子88 (myeloid differentiation factor 88, MyD88)、磷酸化抑制性κB(phosphorylated IκB, p-IκB)、NF-κB/p65蛋白含量的变化；电泳迁移率法(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)检测细胞核中NF-κB与DNA的结合率。分析IL-4、IL-10和IL-12含量的变化与MyD88-NF-κB信号途径的关系。试验结果显示：IFA定位检测显示PCV2感染6h后可在淋巴细胞内观察到PCV2抗原,并主要存在细胞浆；流式细胞定量检测结果,PCV2对淋巴细胞的感染率随时间而增加,感染后6h为1.19%,到48 h达17.48%。细胞培养上清液中IL-4含量,PCV2组低于对照组及抑制剂-PCV2组,且在12 h、24 h、48 h差异显著(P<0.05),对照组与抑制剂-PCV2组无差异。感染12 h后PCV2组IL-10含量显著高于对照组(P<0.05)；且抑制剂-PCV2组上清液中IL-10含量与PCV2组并无差异。PCV2组细胞培养上清液中IL-12含量,6h、12h、24h显著高于同时间对照组(P<0.05)；抑制剂-PCV2组显著或极显著低于PCV2组(P<0.05或P<0.01)。PCV2感染后,淋巴细胞胞浆内MyD88的蛋白含量均显著高于同时间对照组(P<0.01或P<0.05)；PCV2组与抑制剂-PCV2组之间无显著差异。PCV2组淋巴细胞胞浆内p-IκBα的蛋白含量,24 h时显著高于对照组(P<0.05),48 h极显著升高(P<0.01)；抑制剂-PCV2组从6h开始极显著低于PCV2组(P<0.01)。IFA法定位检测NF-κB/p65入核情况,攻毒后6 h PCV2组淋巴细胞胞核内可观察到NF-κ.13/p65蛋白核易位并随时间增加。蛋白定量结果表明,PCV2组淋巴细胞胞浆中NF-κB/p65含量逐渐降低,从12h开始均显著低于对照组(P<0.05)；对照组、抑制剂组、抑制剂-PCV2组之间元显著差异。感染后胞核中NF-κB/p65含量逐渐增加,6 h到48 h每个时间点均极显著高于对照组(P<0.01)；抑制剂-PCV2组均极显著低于PCV2组(P<0.01或P<0.05)。EMSA试验结果表明,感染后12 h、48 h,PCV2组淋巴细胞胞核中NF-κ,B与DNA的结合率极显著高于对照组(P<0.0I),24 h与对照组相比结合率显著增加(P<0.05)；抑制剂-PCV2组极显著低于PCV2组(P<0.01)。结果表明：PCV2可感染体外培养的仔猪淋巴细胞,并通过MyD88-NF-κB信号途径调控淋巴细胞IL-4、IL-12的分泌。