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目的:以蒙古黄芪(正品黄芪)为对照,比较几种云南代表性黄芪属植物主要活性成分含量和指纹图谱相似度。从体外和体内水平比较云南黄芪、梭果黄芪和蒙古黄芪的抗血栓活性差异。本文的两部分研究结果为云南黄芪属植物资源的开发利用提供数据支持。方法:1.主要活性成分含量测定:(1)毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定。采用Aglient 1260HPLC,DAD检测器,Aglient SB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,3.5μm),以乙腈(A)-水为流动相进行梯度洗脱,检测波长254 nm。(2)总皂苷含量测定。以黄芪甲苷为对照品,采用香草醛-高氯酸比色法,于540 nm处测定吸光度。2.指纹图谱相似度比较:采用高效液相色谱(HPLC)法,以乙腈和水为流动相对样品进行梯度洗脱,构建几种黄芪属植物粗提物和粗提物不同有机试剂萃取部位的指纹图谱,运用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012版)计算相似度,比较:(1)云南黄芪属植物与蒙古黄芪地下部分的相似度;(2)云南黄芪属植物地下部分之间的相似度;(3)云南黄芪属植物自身地上部分与地下部分的相似度。3.抗血栓作用比较:(1)体外实验。大鼠腹主动脉取血后,37℃自然凝固制成体外血栓。加入高、中、低浓度的蒙古黄芪、云南黄芪和梭果黄芪提取物孵育24 h。称取剩余血凝块重量后计算血栓溶解率以比较三种黄芪体外抗凝作用。(2)体内实验。连续灌胃给予大鼠高、低剂量的蒙古黄芪、云南黄芪和梭果黄芪提取物7 d后,Fe Cl3环孵大鼠颈总动脉制备体内血栓模型。20 min后取血,Elisa法测定血浆中血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素F1α(6-K-PGF1α)水平,然后称取Fe Cl3孵育血管段中的血栓重量以比较三种黄芪体内抗凝作用。4.出血风险比较:连续灌胃给予小鼠高、低剂量的蒙古黄芪、云南黄芪和梭果黄芪提取物4 d后,剪断鼠尾测定尾出血时间以评价三种黄芪的出血风险。结果:1.主要活性成分含量:(1)毛蕊异黄酮葡萄糖苷:蒙古黄芪中含量为0.035%,云南黄芪属植物中仅梭果黄芪含有毛蕊异黄酮葡萄糖苷,含量为0.017%。(2)总皂苷:蒙古黄芪中的含量为3.84%,云南黄芪属植物中总皂苷含量由高到低为:黑毛多枝黄芪(6.51%)、梭果黄芪(4.38%)、中甸黄芪(4.30%)、无茎黄芪(2.87%)、黑毛黄芪(2.79%)、肾形子黄芪(2.50%)、地八角(2.25%)、云南黄芪(1.84%)、长果颈黄芪(1.82%)。2.指纹图谱相似度:(1)云南黄芪属植物与蒙古黄芪地下部分的相似度。粗提物与蒙古黄芪的相似度在0.103~0.906之间,其中黑毛黄芪与蒙古黄芪的相似度最高;粗提物石油醚萃取部位与蒙古黄芪的相似度在0.041~0.810之间,其中梭果黄芪与蒙古黄芪的相似度最高;粗提物乙酸乙酯萃取部位与蒙古黄芪的相似度在0.002~0.302之间,其中云南黄芪与蒙古黄芪的相似度最高;粗提物正丁醇萃取部位与蒙古黄芪的相似度在0.025~0.193之间,其中黑毛多枝黄芪与蒙古黄芪的相似度最高;粗提物水萃取部位与蒙古黄芪的相似度在0.565~0.984之间,其中长果颈黄芪与蒙古黄芪的相似度最高。(2)云南黄芪属植物地下部分之间的相似度。各植物粗提物之间的相似度在0.059~0.888之间,平均相似度为0.404,其中长果颈黄芪与黑毛黄芪的相似度最高;石油醚部位之间的相似度在0.046~0.962之间,平均相似度为0.469,其中长果颈黄芪与地八角的相似度最高;各植物乙酸乙酯萃取部位之间的相似度在0~0.506之间,平均相似度为0.071,其中肾形子黄芪与黑毛黄芪的相似度最高;各植物正丁醇萃取部位之间的相似度在0.010~0.417之间,平均相似度为0.176,其中长果颈黄芪与地八角的相似度最高;各植物水萃取部位之间的相似度在0.092~0.980之间,平均相似度为0.666,其中地八角与黑毛多枝黄芪的相似度最高。(3)云南黄芪属植物自身的地上部分与地下部分相似度。各云南黄芪属植物自身的地上部分和地下部分具有一定的相似度,相似度在0.143~0.703之间,其中黑毛多枝黄芪的地上部分和地下部分相似度最高。3.抗血栓活性比较:(1)体外实验。高浓度(30 mg/m L)时溶解体外血栓的能力为云南黄芪>梭果黄芪>蒙古黄芪;中浓度(15 mg/m L)时溶解体外血栓的能力为梭果黄芪>云南黄芪>蒙古黄芪;低浓度(7.5 mg/m L)时三种黄芪均无明显溶解体外血栓的能力。(2)体内实验。高剂量(300 mg/kg)时溶解体内血栓的能力为梭果黄芪>蒙古黄芪>云南黄芪;低剂量(150 mg/kg)时溶解体内血栓的能力为梭果黄芪>云南黄芪>蒙古黄芪。与假手术组比较,血栓模型组TXB2/6-K-PGF1α的比值升高,三种黄芪均能降低该比值,两个剂量的降低能力均为云南黄芪>梭果黄芪>蒙古黄芪。4.出血风险比较:低剂量(300 mg/kg)的蒙古黄芪和高(600 mg/kg)、低剂量(300mg/kg)的梭果黄芪均能显著延长小鼠尾出血时间。三种黄芪的出血风险为:梭果黄芪>蒙古黄芪>云南黄芪。结论:1.活性成分含量表明仅梭果黄芪含有蒙古黄芪的活性成分—毛蕊异黄酮葡萄糖苷;多种云南黄芪属植物含有皂苷,中甸黄芪、梭果黄芪和黑毛多枝黄芪总皂苷的含量高于蒙古黄芪,因此,梭果黄芪替代正品黄芪的可能性大。指纹图谱相似度表明,云南黄芪属植物与蒙古黄芪所含化学成分差异较大,替代正品黄芪的可能性小;云南黄芪属植物之间所含化学成分差异较大,相互替代的可能性小;黑毛多枝黄芪的地上部分和地下部分化学成分相似度最高,地上部分替代地下部分的可能性大。2.梭果黄芪对体外和体内血栓形成均有抑制作用,但是有一定的出血风险,云南黄芪抗血栓作用弱于梭果黄芪,但出血风险较小。较蒙古黄芪,两种黄芪更具有抗血栓药物开发潜力。