番木瓜是著名的热带亚热带水果之一,素有“岭南佳果”的美称,而番木瓜环斑病毒(PRSV)现已成为制约番木瓜生产的世界性严重病害的病原。PRSV是植物病毒中最大—马铃薯Y病毒属的一个重要成员,是引起番木瓜病毒病的最主要的病毒之一。为研究番木瓜高抗谱抗病毒的机制以及培育出适合在我国栽培的高抗谱抗环斑病毒且安全性好的番木瓜新品系。本项目采用RNA介导抗病毒基因工程策略,通过对海南、云南、广西和广东等不同番木瓜生产区的PRSV-CP的序列进行分析比较,并且利用RT-PCR方法克隆了PRSV-CP同源区段,设计特异引物克隆PRSV-CP的3’端278bp高度同源的DNA区段,并构建六种RNA介导的植物表达载体,分别为:p2301CP+、p2301CP-、p2301CPu、p2301CPuL、pBCP+、pBCP-。然后采用花粉管通道技术将含有CP基因同源DNA片段的表达载体导入soloⅡ,并对导入时花朵大小、导入液类别、环境因子等参数进行了较系统的探研,获得了比较理想的导入条件:①均在晴朗的天气,气温不宜超过30℃,也不宜低于10℃;②花粉供体花一般采用两性花;③质粒导入液的浓度为1μg/μL,受体花一般长为2.0-4.0厘米;④农杆菌为导入液的OD值一般为0.8-1.0,另附加Silwet L-77(0.5μl/mL),受体花一般长3.0-4.5厘米;从而建立了利用质粒DNA和农杆菌为导入液的花粉管通道技术平台。目前已经获得了6种载体的转基因番木瓜果实以及转基因幼苗,并且通过PCR检测初步检测到了部分阳性植株。这为获到广谱抗番木瓜环斑病毒的优良新品种(系)打下了良好的研究基础。