银杏内酯B衍生物(XQ)抗血小板聚集作用及机理研究

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目的探索XQ对血小板聚集功能、血小板粘附功能、血小板释放功能影响的生物活性及机理,为临床使用提供参考。方法以曲克芦丁、双嘧达莫和银杏内酯B(GB)为对照药物,(1)运用比浊法,测定体内、外给予不同浓度的XQ对PAF、ADP、AA、COL诱导家兔血小板聚集的抑制作用。(2)通过血小板计数,测定XQ对胶原与家兔血小板接触引起的粘附的抑制作用。(3)采用荧光分光光度法,测定体内、外给予不同浓度的XQ对PAF诱导家兔血小板释放5-HT的抑制作用。(4)采用放射免疫法,根据血栓素A2(TXA2)和前列腺环素(PGI2)在体内迅速生物转化成TXB2和6-keto-PGF的原理,测定XQ对PAF诱导家兔血小板释放血栓素A2(TXA2)和前列腺环素(PGI2)的作用。(5)采用荧光分光光度法,测定体内、外给予XQ对PAF诱导家兔血小板释放Ca2+的抑制作用。(6)采用ELISA法,测定XQ对PAF诱导家兔血小板释放β-TG和PF4的抑制作用。(7)采用放射配基法,测定XQ对PAF与PAF受体特异性结合的拮抗作用。结果(1)XQ体外给药(0.037、0.37、3.7、37、370、1852、3704μg/ml),对PAF、ADP、AA、COL诱导的家兔血小板聚集均有抑制作用。XQ对PAF、ADP、AA、COL诱导剂的IC50分别为0.149μg/ml、720μg/ml、178μg/ml、4693μg/ml。XQ单次给药(0.25、0.5、1mg/kg剂量),对PAF、ADP、AA、COL诱导的家兔血小板聚集的抑制作用较弱,与空白对照组比较差异无显著性意义。而经每日1次,连续5日给药后,则明显抑制血小板聚集(P<0.05,0.01))。(2)XQ三个剂量组(0.25、0.5、1mg/kg)对胶原与家兔血小板接触引起的粘附有抑制作用,与空白对照组比较差异有非常显著性意义(P<0.05,P<0.01)。(3)XQ 0.037、0.37、3.7、37、370、3700μg/ml六个剂量组对PAF诱导家兔血小板释放5-HT有抑制作用,与空白对照组比较差异有非常显著性意义(P<0.05,P<0.01)。XQ 0.25、0.5、1mg/kg三个剂量组对PAF诱导家兔血小板释放5-HT均有抑制作用,其中XQ 0.5、1mg/kg两个剂量组与空白对照组比较差异有非常显著性意义(P<0.01)。(4)XQ 0.25、0.5、1 mg/kg三个剂量组对PAF诱导家兔血小板释放TXB2和6-keto-PGF有抑制作用,并可降低TXB2/6-keto-PGF比值,其中XQ1 mg/kg个剂量组与空白对照组比较差异有显著性意义(p<0.05)。(5)体外给予XQ 0.036、0.36、3.6、36、360、3600μg/ml六个剂量组对PAF诱导家兔血小板释放[Ca2+]均有抑制作用,与空白对照组比较差异有非常显著性差异(P<0.01)。体内给予XQ 0.25、0.5、1mg/kg三个剂量组对PAF诱导家兔血小板释放[Ca2+]均有抑制作用,与空白对照组比较差异有非常显著性差异(P<0.01)。(6) XQ 0.25、0.5、1mg/kg三个剂量组对PAF诱导家兔血小板释放β-TG和PF4均有抑制作用,与空白对照组比较差异有非常显著性意义(P<0.05,P<0.01)。(7) PAF与家兔血小板膜上PAF受体结合的平衡解离常数(KD)=1.65×10-2nmol/L,最大结合容量(BMAX)=7.99×10-12nmol/108血小板。XQ和GB对PAF与家兔血小板膜上PAF受体结合的抑制常数(Ki)分别为9.6210×10-3、7.21×10-2nmol/L。结论XQ通过拮抗PAF与家兔血小板PAF受体特异性结合,抑制PAF、ADP、AA、COL诱导的家兔血小板聚集,抑制胶原诱导的血小板粘附,抑制PAF诱导的家兔血小板释放反应,如5-HT、Ca2+、TXA2、β-TG、PF4等物质的释放。而且,与GB比较,XQ对PAF与家兔血小板PAF受体特异性结合的拮抗作用更强。
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