剑麻斑马纹病病原生物学及rDNA-ITS序列分析

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龙舌兰麻,俗称剑麻,是我国和世界热带、南亚热带地区最重要的纤维作物。剑麻斑马纹病是当前影响我国剑麻生产最严重的病害。 该病由烟草疫霉菌(PhytophthoranicotianaeBreda)引起。可造成植麻区麻田早期大量缺株,剑麻生产受到重创,产量大幅降低。因此摸清剑麻斑马纹病病原的遗传类型、致病类型对剑麻抗病育种制定正确的育种目标、鉴定筛选育种材料和生产上进行病害防治及预测均具有重要的意义。 本研究的内容和结果主要包括以下五个方面: 1、对海南、广东、广西三省区主要剑麻产区的斑马纹病调查表明,三省区均有斑马纹病发生,其中以广东发病率和病情最严重,海南最轻。通过采集病样,进行分离纯化培养,共获得病原菌株117个. 2、对病原生物学特性的初步观察表明:所有参试菌株之间菌落、分生孢子形态及其大小总体变化幅度不大;病原菌的最适生长温度为24~28℃,pH为6.0~7.0,光照为24h连续光照,湿度为90%~95%,培养基为CA培养基。 3、致病力测定试验结果表明,各参试菌株均能在剑麻叶片上引起斑马纹病的典型症状。各菌株的潜伏期为1~3d。严重在各菌株之间差异较大,刺伤处理72h,病斑扩展平均直径最长的菌株为CH0025,直径长度为3.6cm,说明其致病力最强:平均直径最短的菌株为CH0055,直径长度只有0.3cm,说明其致病力最差;菌株致病力存在着显著差异,这说明参试菌株之间存在着小种致病力变异。 4、对5种药剂的敏感性比较。采用菌落生长速率测定法,在室内测定了参试菌株对甲霜灵、疫霜灵、乙膦铝、代森锰锌、敌克松共5种药剂的敏感性。结果表明:不同菌株对同一种药剂或相同菌株对不同药剂的敏感性均不相同。其中,参试菌株对乙膦铝和疫霜灵这两种药剂的敏感性较高,其EC50分别在0.4339~0.6520μg/mL、0.8118~0.9285μg/mL之间,敌克松和代森锰锌次之,其EC50分别为2.1797~3.1036μg/mL、3.3018~4.1643μg/mL之间;而甲霜灵则最低,其EC50在13.4073~28.3130μg/mL之间。 5、参试菌株的rDNA-ITS区序列分析。扩增了12个参试菌株的rDNA-ITS,并测序和利用序列信息聚类分析以及在计算机网络上与数据库的序列进行比对。结果表明:12个参试菌株的ITS长度(ITS1-ITS4)均为900bp左右,经在NCBI网站的blast比对分析,结果表明12个参试菌株均为烟草疫霉菌。参试菌株在序列同源性为38%被聚为两个类群,供试菌株间存在两个差异明显的遗传类型,说明广东、海南的菌株与广西菌株在地域上有种内遗传分化。
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