体外冲击波联合手法牵引对改善膝关节伸直挛缩大鼠关节功能障碍及对PTEN-PI3K/AKT信号通路影响的初步研究

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目的本研究旨在探讨体外冲击波联合手法牵引对伸直固定所致大鼠关节囊挛缩的干预作用及对PTEN-PI3K/AKT信号通路的影响。方法用支具外固定法固定大鼠膝关节。36只SD雄性大鼠随机分成六组。对照组(C组)左膝关节未固定。其他组大鼠左膝关节伸直0°位进行支具固定。制动四周后,随机分成5组:模型组(M组)、自然恢复组(NR组)、体外冲击波治疗组(ET组)、手法牵引治疗组(MT组)、体外冲击波联合手法牵引治疗组(CT组)。关节活动度测量仪用来评价患者的左膝关节活动度(ROM);苏木精-伊红染色(HE染色)和马松染色分别用来评价左膝前部关节囊的细胞数量和胶原沉积的情况;免疫组织化学染色和蛋白质免疫印迹(Western Blot)试验用来评价左膝前部关节囊磷酸酶和紧张素同源蛋白(PTEN)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)以及蛋白激酶B(AKT)的蛋白含量。结果1.各组大鼠膝关节活动度的检测结果为:与C组相比,M组膝关节活动度明显降低(P<0.05);与NR组相比,ET组、MT组和CT组的膝关节活动度均有明显提高(P<0.05),CT组的膝关节活动度则显著高于ET组和MT组(P<0.05)。2.苏木精和伊红染色和马松染色结果显示:与C组相比,M组细胞数量和胶原沉积明显升高(P<0.05);NR组与M组间差异无统计学意义(P>0.05);ET、MT和CT组细胞数量和胶原沉积较NR组下降(P<0.05);与ET组或MT组相比,CT组有统计学意义(P<0.05)。3.免疫组织化学染色结果显示:与C组相比,M组PTEN的光密度值显著降低(P<0.05);NR组与M组间差异无统计学意义(P>0.05);ET组、MT组和CT组的PTEN光密度值相对于NR组增加(P<0.05),CT组的PTEN光密度值相对于ET组和MT组增加(P<0.05)。M组PI3K/AKT的光密度值较C组升高(P<0.05);NR组与M组间差异无统计学意义(P>0.05);ET组、MT组和CT组的PI3K/AKT光密度值相对于NR组降低(P<0.05),CT组的PI3K/AKT光密度值相对于ET组和MT组降低(P<0.05)。4.蛋白质免疫印迹结果:与C组相比,M组的PTEN表达水平明显下降(P<0.05),PI3K/AKT表达水平增加(P<0.05);NR组与M组相比,PTEN、PI3K/AKT蛋白表达无明显变化,差异没有统计学意义(P>0.05);与NR组相比,ET组、MT组、CT组PTEN表达水平增加(P<0.05),PI3K/AKT表达水平显著减少(P<0.05);与ET组、MT组相比,CT组PTEN表达水平提高(P<0.05),PI3K/AKT表达水平下降(P<0.05)。结论体外冲击波联合手法牵引可有效减轻大鼠关节挛缩模型中关节囊纤维化的组织学病理改变,上调纤维化关节囊中PTEN的蛋白表达并下调PI3K和AKT的蛋白表达。
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