【摘 要】
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目的:构建人白细胞介素(IL-3)与假单胞菌外毒素片段(PE38KDEL)融合基因的原核表达载体,为进一步表达具有杀伤作用的融合蛋白奠定基础。方法:1)提取人外周血总RNA,经RT-PCR扩
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目的:构建人白细胞介素(IL-3)与假单胞菌外毒素片段(PE38KDEL)融合基因的原核表达载体,为进一步表达具有杀伤作用的融合蛋白奠定基础。方法:1)提取人外周血总RNA,经RT-PCR扩增出IL-3基因,并用二次PCR方法引入柔性连接肽linker片段,PCR产物插入载体PQE30中,转化克隆进行酶切鉴定及DNA测序肯定克隆结果。2)以PGEX-4T-1PE38KDEL质粒为模板,PCR扩增PE38KDEL片段,PCR产物经双酶切后插入到PQE30-IL-3质粒中构建PQE30-IL-3-PE38KDEL,连接产物转化克隆经酶切鉴定及DAN测序鉴定。结果:本研究成功构建了原核表达质粒PQE30-IL-3-PE38KDEL.经酶切鉴定与预期结果吻合,核酸序列测定显示插入的IL-3基因及PE38KDEL基因与Genebank报道的序列完全一致。
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