论文部分内容阅读
天麻素(gastrodin)是一种酚型糖苷类化合物,它具有显著的生物学活性和药理活性。本论文主要研究黄绿密环菌生物转化合成天麻素的转化条件优化以及产物的分离纯化,对分离得到的产物进行结构鉴定,并对合成的天麻素进行动物试验评价,研究其抗炎以及免疫调节功能,并初步研究生物转化体系中葡萄糖基转移酶的酶学性质,为后续深入研究和调控天麻素生物合成提供试验依据。首先研究建立转化体系中天麻素和对羟基苯甲醇的检测方法,确定转化体系中天麻素和对羟基苯甲醇的反相高效液相色谱法(RP-HPLC),色谱柱为Waterssymmetry C18反相柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相:0.02%磷酸溶液-甲醇(体积比为5:95),检测波长:220 nm,流速:0.5 mL/min,柱温35:℃。通过单因素实验和响应面实验设计对生物转化中的条件进行优化,确定相应的转化条件为初始pH 4.5,在30 mL转化液中底物浓度为3 mg/mL,加入静息细胞量为6.5 g,添加质量分数为3%的葡萄糖和1.5%的吐温80,并对转化动力学进行相应的研究,初步构建了转化合成动力学模型。初步研究转化体系中糖基转移酶的酶活测定方法和酶学性质,测得糖基转移酶的最适反应温度为50℃,在30℃稳定性最好;糖基转移酶的最适作用pH为6,在pH为6-7范围内稳定性较好。采用硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20等色谱分离方法相结合对转化产物进行分离纯化,分离得到的两个组分经RP-HPLC、核磁共振分析等分析证实是天麻素和对羟基苯甲醇。对合成的天麻素进行动物实验,研究其抗炎及对免疫功能的影响。研究证实合成的天麻素具有抗炎的作用,并且对正常小鼠的非特异性免疫和细胞免疫功能具有增强作用。