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噬菌体展示技术是单克隆抗体筛选的关键技术之一，在抗体筛选领域中的应用占有越来越大的比例。CD46又称辅膜蛋白，是广泛存在于有核细胞表面的一种受体，在哺乳动物中相对保守，并在先天免疫的补体的激活和调节的经典途径和替代途径中起着关键作用，除此之外CD46还是一些病毒和细菌的细胞受体。本研究充分利用哺乳动物保守蛋白在禽源免疫系统中具有更高的免疫原性，结合禽源抗体可变区基因更易克隆扩增的优势，采用噬菌体展示技术构建抗猪源CD46的单链抗体库，并从中筛选出特异性抗CD46的scFv，为高亲和力、高特异性禽源单克隆抗体的制备提供技术支撑。本研究采用DNA和蛋白复合免疫的方式免疫SPF公鸡，先用真核表达载体pcDNA-CD46和pCAGG-CD46免疫，然后用原核表达的CD46-His融合蛋白为免疫原。监测血清效价，经4次免疫，分离脾脏B淋巴细胞，提取总RNA后反转录成cDNA，根据文献报道的引物分别扩增VH和VL基因，经重叠PCR大量扩增scFv。选取Sfi I和Not I为酶切位点，酶切消化scFv和pCANTAB5E后，用T4DNA连接酶，将scFv基因连接入pCANTAB5E噬菌粒载体，并将重组载体化学转化入大肠杆菌TG1，采用梯度稀释的方式计算得到的原始抗体库库容为6.0×105。随机挑取10个单克隆，PCR显示阳性率为100%，BstO I酶切其中的8个克隆，其中2个克隆的结果相似，判定库的多样性较丰富。用抗原包被（包被浓度依次为10、5、2.5和2μg/mL）的免疫管进行了4轮固相淘选，使特异性抗体得到了有效富集。库容分别为3.9×106、1.81×107、5.84×108和4.11×109。经phage ELISA判定每轮淘选结束时抗体库与CD46的结合性逐渐升高，说明特异性的噬菌体得到了有效富集。从第4轮淘选结果中随机挑取单克隆，经PCR分析得到23株阳性克隆。应用phage ELISA检测噬菌体融合scFv与CD46的反应性，最终得到三株反应性良好的scFv-phage克隆。本研究以CD46为免疫原，构建了鸡源scFv噬菌体展示抗体库，并筛选到了3株具有抗CD46活性的scFv，且与CD46蛋白的反应性良好。为以禽源scFv抗体为基础构建的CD46检测试剂盒的建立和与CD46相关的免疫学和病理学研究奠定了基础。